鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物与应用

本发明涉及分子标记技术，具体涉及鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物与应用。

背景技术：

1、黄颡鱼(pelteobagrusfulvidraco)俗称黄姑子、黄骨鱼、黄辣丁等，隶属于鲇形目(siluriformes)、鲿科(bagridae)、黄颡鱼属(pelteobagrus)，广泛分布于我国淡水水体中。因其肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富、无肌间刺等特点，而备受广大消费者的青睐，同时其具有较强的免疫能力，已逐渐成为我国重要经济鱼类。瓦氏黄颡鱼(pelteobagrusvachelli)，俗称江黄颡，为我国特有种，是黄颡鱼属中个体最大的种，最大个体可达1850克。杂交黄颡鱼(p.fulvidraco♀×p.vachelli♂)是以瓦氏黄颡鱼为父本、黄颡鱼为母本的杂交后代。杂交黄颡鱼具有受精率和存活率高、生长快、抗病力强、肉质好等特点，显现出较强的杂种优势，因而深受水产养殖户和消费者喜爱，已成为当今最为广泛养殖的黄颡鱼品种。但杂交黄颡鱼与其亲本的体型形态极为相似，仅靠形态学特征难以将之区分，尤其是在幼苗时期更难识别鉴定。随着近年来杂交黄颡鱼的养殖产量持续上升，加之生产过程中近交严重，导致当下养殖的黄颡鱼种质退化严重，因而迫切需要一种能快速、准确、可靠的鉴定三种黄颡鱼的dna分子标记，以期为黄颡鱼亲本保种和优良品种的选育提供重要分子工具。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物与应用，提供了一种稳定、高效识别黄颡鱼及其瓦氏黄颡鱼杂交种的方法，为黄颡鱼下一步的保种、育种及杂交选育研究奠定坚实基础，并且能够更好在生产实践中去应用。

2、为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：

3、鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物，所述引物为针对spoplb基因的dna分子标记，包括正向引物与反向引物，其核苷酸序列如seq id no.1-2所示。

4、另一方面，本发明提供基于上述引物鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的方法，包括：提取待测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的基因组dna，利用上述引物进行pcr扩增，得到三个不同的pcr产物。以上述三个不同pcr产物扩增的凝胶电泳结果来判断其种类，只扩增出一条条带的为黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼；同时扩增出黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼各自存在的条带的为瓦氏黄颡鱼与黄颡鱼杂交种黄颡鱼。

5、进一步的，所述dna分子标记，在黄颡鱼中只扩增出一条条带，在瓦氏黄颡鱼中只扩增出一条条带，在杂交种黄颡中同时扩增出黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼各自特有条带。

6、另一方面，本发明提出一种试剂盒，所述试剂盒包括上述引物。

7、另一方面，本发明提出上述引物在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种辅助选择育种中的应用。

8、进一步的，本发明提出上述引物在检测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种种系鉴别中的应用。

9、另一方面，本发明提出上述试剂盒在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种辅助选择育种中的应用。

10、进一步的，本发明提出上述试剂盒在检测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种种系鉴别中的应用。

11、本发明的有益效果：

12、本发明提供了一种稳定、高效识别黄颡鱼及其瓦氏黄颡鱼杂交种的方法。通过引物设计和pcr扩增技术，可以快速、准确地鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼和杂交种，对于黄颡鱼的保种、育种以及杂交选育研究提供了重要的分子工具。通过利用spoplb基因的dna分子标记，可以针对不同种类的黄颡鱼进行特异性扩增，从而得到不同的pcr产物。这种方法具有高度的特异性和灵敏性，对于精确鉴别三种黄颡鱼具有重要的意义。

13、本发明的引物设计基于spoplb基因的dna分子标记。spoplb基因在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼和杂交种中具有显著的遗传差异，这主要是由于它们来自不同的亲本。通过选择与spoplb基因相关的核苷酸序列作为引物，可以实现对这些物种进行特异性扩增。这种基于dna分子标记的识别方法在准确鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼和杂交种方面具有优势，相较于传统的形态鉴别方法更为可靠和准确。

14、本发明提供了一种试剂盒，包括上述引物。试剂盒的设计遵循了实验操作的方便性和实验结果的稳定性。试剂盒中的引物经过严格筛选和验证，可以保证引物的特异性和扩增效率。同时，试剂盒还包含了其他必要的试剂和缓冲液，可以一站式提供实验所需材料，节省了实验设计和试剂购买的时间和成本。

15、本发明的引物的应用领域广泛。除了在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼和杂交种的鉴别中应用外，这些引物还可以用于辅助选择育种和种系鉴别。通过分子标记技术，可以对黄颡鱼的遗传多样性进行研究，了解遗传变异和种群结构，为优良品种的选育和种系的鉴别提供重要的参考依据。同时，这些引物还可以应用于数量遗传学研究，如遗传标记辅助选育和亲本选择等，进一步推动黄颡鱼产业的发展。

16、综上所述，上述各点的专业详细完善主要强调了鉴别方法的特异性和准确性，引物设计的基于分子标记的原理，试剂盒的方便和稳定性，以及引物在种质保护和优良品种选育中的广泛应用。这些完善的内容进一步突出了技术方案的专业性和实用性，为黄颡鱼相关研究和养殖提供了重要的支持。

17、当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

技术特征：

1.鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物，其特征在于，所述引物为针对spoplb基因的dna分子标记，包括正向引物与反向引物，其核苷酸序列如seq id no.1-2所示。

2.基于权利要求1所述引物鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的方法，其特征在于：包括：提取待测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的基因组dna，利用上述引物进行pcr扩增，得到三个不同的pcr产物。以上述三个不同pcr产物扩增的凝胶电泳结果来判断其种类，只扩增出一条条带的为黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼；同时扩增出黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼各自存在的条带的为瓦氏黄颡鱼与黄颡鱼杂交种黄颡鱼。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述dna分子标记，在黄颡鱼中只扩增出一条条带，在瓦氏黄颡鱼中只扩增出一条条带，在杂交种黄颡中同时扩增出黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼各自特有条带。

4.鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述引物。

5.如权利要求1所述引物在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种辅助选择育种中的应用。

6.如权利要求1所述引物在检测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种种系鉴别中的应用。

7.如权利要求4所述试剂盒在黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种辅助选择育种中的应用。

8.如权利要求4所述试剂盒在检测黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种种系鉴别中的应用。

技术总结
本发明涉及分子标记技术，具体涉及鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种的引物与应用，所述引物为针对spoplb基因的DNA分子标记，包括正向引物与反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示；经测序鉴定表明所述DNA分子标记位于spoplb基因上。本发明公开了检测该分子标记的引物对和检测方法。利用该DNA分子标记，可以有效鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及其杂交种。这个分子标记可为黄颡鱼优良亲本的保育和新品种的选育提供重要的应用基础和分子工具。该方法准确可靠，操作简便。

技术研发人员：文正勇,覃川杰,石琼,魏秀英,曾万弘,吕云云,李燕平
受保护的技术使用者：内江师范学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15