重组柯萨奇病毒A10VLP及其用途的制作方法

本发明涉及医药领域，特别是涉及重组柯萨奇病毒a10 vlp及其用途。

背景技术：

1、手足口病是一种5岁以下儿童常见的婴幼儿传染病，主要临床表现为手、足和口等部位出现小疱疹或小溃疡，少数患儿可引起肺水肿、无菌性脑膜脑炎、心肌炎等一系列并发症甚至导致死亡。手足口病是由人肠道病毒属的柯萨奇病毒a组16、4、5、7、9、10，b组2、5型以及肠道病毒71型和埃可病毒30感染引起的，其中肠道病毒71和柯萨奇病毒a16是导致手足口病暴发的主要病原体。近年来由柯萨奇病毒a10感染的报道越来越常见。目前尚无针对柯萨奇病毒a10的特异性药物，因此疫苗就成为预防柯萨奇病毒a10感染的最有效的方法。柯萨奇病毒a10属于小rna病毒科肠道病毒属，为无包膜的二十面立体对称球形颗粒，其基因组是单股正链rna，两端为保守的非编码区，中间为一个开放阅读框的编码区，此编码区编码结构蛋白p1和非结构蛋白p2与p3，其中p1可被蛋白酶3cd切割为衣壳蛋白vp0、vp3和vp1，并组装成病毒的衣壳。这些衣壳蛋白与病毒rna可进一步组装为真病毒，并伴随着vp0切割为vp4和vp2。病毒样颗粒(virus-like particle，vlp)与病毒在形态与组成上相似，可诱导较好的免疫反应，为柯萨奇病毒a10疫苗的开发提供了一种方案。研究表明，共表达柯萨奇病毒a10结构蛋白p1和3cd后可切割为vp0、vp3和vp1衣壳蛋白，并进一步组装成柯萨奇病毒a10 vlp，且该vlp可以保护小鼠免受柯萨奇病毒a10致死性攻击。但制备的vlp的vp0会发生不同程度的降解，产生vp4和vp2，从而影响vlp的均一性。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供重组柯萨奇病毒a10 vlp及其用途，用于解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种多核苷酸，所述多核苷酸为以下任一：

3、1)第一多核苷酸：包括编码柯萨奇病毒a10的vp2、vp3和vp1衣壳蛋白的核苷酸，不包括rbs序列和编码柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白的核苷酸；

4、2)第二多核苷酸：包括编码柯萨奇病毒a10的vp4、vp2、vp3和vp1衣壳蛋白的核苷酸，不包括rbs序列和编码柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白的核苷酸。

5、本发明还提供一种核酸构建体，所述核酸构建体包括任一所述多核苷酸。

6、本发明还提供一种细胞系，所述细胞系中包括所述核酸构建体，或基因组中整合有任一所述多核苷酸。

7、本发明还提供一种重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒，所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒选自以下任一：

8、1)包括vp2、vp3和vp1衣壳蛋白，不包括柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白；

9、包括vp4、vp2、vp3和vp1衣壳蛋白，不包括柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白。

10、本发明还提供所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

11、1)培养所述细胞系，使其表达重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒；

12、2)分离出所述细胞系表达的重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒。

13、本发明还提供所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒在制备预防手足口病产品中的用途。

14、本发明还提供一种用于预防手足口病的药物组合物，所述药物组合物包括所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒和药学上可接受的载体。

15、如上所述，本发明的重组柯萨奇病毒a10 vlp及其用途，具有以下有益效果：柯萨奇病毒a10 vlp-231和vlp-4231解决了vp0降解的问题，进一步的免疫原性研究发现柯萨奇病毒a10 vlp-231和vlp-4231可在小鼠体内诱导良好的特异抗体水平，为柯萨奇病毒a10的疫苗研发提供了新思路。

技术特征：

1.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括编码柯萨奇病毒a10的vp4、vp2、vp3和vp1衣壳蛋白的核苷酸，不包括rbs序列和编码柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白的核苷酸，编码柯萨奇病毒a10的vp4、vp2、vp3和vp1衣壳蛋白的核苷酸排列顺序为：vp4-vp2-vp3-vp1，所述编码柯萨奇病毒a10的vp2衣壳蛋白的核苷酸编码氨基酸序列如seq id no:4所示的vp2衣壳蛋白；所述编码柯萨奇病毒a10的vp3衣壳蛋白的核苷酸编码氨基酸序列如seq idno:5所示的vp3衣壳蛋白；所述编码柯萨奇病毒a10的vp1衣壳蛋白的核苷酸编码氨基酸序列如seq id no:6所示的vp1衣壳蛋白；所述编码柯萨奇病毒a10的vp4衣壳蛋白的核苷酸编码氨基酸序列如seq id no:3所示的vp4衣壳蛋白。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸中各核苷酸的排列顺序为：启动子-vp4-终止子-启动子-vp2-终止子-启动子-vp3-终止子-启动子-vp1-终止子。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，还包括以下中的任一项或多项：

4.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，还包括以下中的一项或几项：

5.一种核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体包括权利要求1-4任一所述的多核苷酸。

6.根据权利要求5所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体的表达载体为酵母表达载体。

7.根据权利要求5所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体的核苷酸序列如seq id no:18所示。

8.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系中包括权利要求5-7任一所述的核酸构建体，或基因组中整合有权利要求1-4任一所述的多核苷酸。

9.根据权利要求8所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系为毕赤酵母细胞系。

10.一种重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒，其特征在于，所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒包括vp4、vp2、vp3和vp1衣壳蛋白，不包括柯萨奇病毒a10其他衣壳蛋白。

11.根据权利要求10所述的重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒，其特征在于，所述重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒由权利要求8或9所述的细胞系产生。

12.权利要求10或11所述的重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒在制备预防手足口病产品中的用途。

13.一种用于预防手足口病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求10或11所述的重组柯萨奇病毒a10病毒样颗粒和药学上可接受的载体。

14.根据权利要求13所述的药物组合物，所述药物组合物为疫苗组合物。

技术总结
本发明涉及医药领域，特别是涉及重组柯萨奇病毒A10VLP及其用途，所述重组柯萨奇病毒A10VLP由基因组中整合有编码柯萨奇病毒A10的VP4、VP2、VP3和VP1衣壳蛋白的细胞系产生。本发明还提供所述重组柯萨奇病毒A10VLP在制备预防手足口病产品中的用途。所述预防手足口病产品为药物组合物，例如为疫苗组合物。在免疫原性研究中发现本发明的柯萨奇病毒A10VLP可避免VP0的降解问题，可在小鼠体内诱导良好的免疫反应，提示该VLP可作为柯萨奇病毒A10的候选疫苗。

技术研发人员：刘庆伟,王晓黎,刘艳,石娜,边金,秦松,赵胜涛,阮丽珠
受保护的技术使用者：华淞（上海）生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15