一种附球菌属真菌及其应用

本发明涉及植物病害防治，具体涉及一种附球菌属真菌及其应用。

背景技术：

1、药用植物的内生真菌可产生与其宿主植物相同或相似的生物活性成分，和其它植物相比，从具有相关药理活性的药用植物内生真菌中探寻生防菌则更具有靶向性和高效性。‘海螺’望春花(yulania denudate‘hailuo’)作为传统的中药材，含有d-柠檬烯、大香叶烯d、蒎烯等活性成分，具有消炎、抗过敏、抗菌、抗癌及抗氧化等活性。到目前为止，针对‘海螺’望春花的研究仅限于观赏及药用价值，与之相关的内生真菌鲜有报道。

2、薄壳山核桃又称美国山核桃、长山核桃，俗称“碧根果”，一种双子叶植物纲胡桃目胡桃科山核桃属的落叶乔木，薄壳山核桃树既可作果用，又可作材用，还可作绿化用，是一种用途广泛、受益诸多且收益时间长、经济效益高、生态价值和社会价值显著的优良经济树种。

3、随着薄壳山核桃产业的快速发展，种植面积和种植规模越来越大，病害问题也曰益凸显。黑斑病严重危害薄壳山核桃的叶片和果实，10年左右的薄壳山核桃林间黑斑病发病尤为严重，叶片上黑斑的发病指数最高达90％以上，严重影响了叶片的光合作用，进而影响树势和产量；在果实上的黑斑，导致大量落果，最高可达50％，严重影响了薄壳山核桃产业的健康发展。如何科学有效地防治薄壳山核桃黑斑病、保证薄壳山核桃的产量是迫切需要解决的现实问题。

4、薄壳山核桃黑斑病为真菌性病害，拟盘多毛孢和炭疽病菌是引起薄壳山核桃黑斑病最严重的病原菌。其主要的防治手段以化学防治为主，常常在生长季节幼果期开始使用杀菌剂进行防治，但是杀菌剂的过量使用带来严重的环境污染和菌株耐药性问题。因此，亟需分离新的抑制相关病原菌的微生物，从而防治薄壳山核桃黑斑病。

技术实现思路

1、为分离新的抑制相关病原菌的微生物，本发明提供了一种附球菌属真菌及其应用，本发明分离获得的附球菌属真菌能够有效抑制薄壳山核桃黑斑病菌果生炭疽菌(colletotrichum fructicola)、大叶黄杨炭疽病菌束状刺盘孢(c.dematium)、香樟炭疽病菌盘长孢状刺盘孢菌(c.gloeosporioides)、瓜炭疽病菌葫芦科刺盘孢(c.orbiculare)、西瓜枯萎病菌西瓜专化型尖孢镰刀菌(f.oxysporum f.sp.niveum)、玉米茎腐病菌禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)和草莓灰霉病菌灰葡萄孢(botrytis cinerea)，能防治由上述病原菌引起的植物病害。

2、本发明提供了一种附球菌属真菌，所述附球菌属真菌命名为ef-wch-86，于2023年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.40679，分类命名为麦斑点附球霉(epicoccum tritici)。

3、本发明还提供了一种所述的附球菌属真菌的发酵产物，通过将ef-wch-86菌株菌饼接种于pdb培养基，于25-27℃、160-180r/min摇床中黑暗条件下，恒温振荡培养8天，获得发酵培养物，分离菌丝与发酵液，用乙酸乙酯萃取发酵液，得萃取液，经旋转蒸发浓缩后获得发酵液粗提物，即为附球菌属真菌的发酵产物。

4、进一步地，乙酸乙酯萃取发酵液的过程为：使用等体积乙酸乙酯萃取，超声半小时，24小时后进行下一次萃取，共3次，合并萃取液。

5、进一步地，旋转蒸发浓缩采用温度为40℃。

6、进一步地，ef-wch-86菌株菌饼接种于pdb培养基培养条件为25℃、180r/min。

7、本发明还提供了所述的附球菌属真菌或所述的附球菌属真菌的发酵产物在抑制病原菌中的应用，所述病原菌包括薄壳山核桃黑斑病菌果生炭疽菌(colletotrichumfructicola)、大叶黄杨炭疽病菌束状刺盘孢(c.dematium)、香樟炭疽病菌盘长孢状刺盘孢菌(c.gloeosporioides)、瓜炭疽病菌葫芦科刺盘孢(c.orbiculare)、西瓜枯萎病菌西瓜专化型尖孢镰刀菌(f.oxysporum f.sp.niveum)、玉米茎腐病菌禾谷镰刀菌(fusariumgraminearum)和草莓灰霉病菌灰葡萄孢(botrytis cinerea)。

8、进一步地，所述附球菌属真菌能够用于植物病害防治。

9、进一步地，所述附球菌属真菌能够用于防治薄壳山核桃黑斑病。

10、进一步地，所述附球菌属真菌还能够用于防治炭疽病、枯萎病、茎腐病、灰霉病。

11、进一步地，所述炭疽病包括大叶黄杨炭疽病、香樟炭疽病、瓜炭疽病。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

13、本发明分离获得的附球菌属真菌ef-wch-86，能够有效抑制薄壳山核桃黑斑病菌、大叶黄杨炭疽病菌、香樟炭疽病菌、瓜炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、玉米茎腐病菌和草莓灰霉病菌，能防治由上述病原菌引起的植物病害；

14、ef-wch-86菌株的发酵液粗提物均对7种植物病原菌具有一定的生长抑制效果，内生真菌ef-wch-86菌株发酵液粗提物对四种病原菌的抑制效果由低到高依次为香樟炭疽病菌(94.8％)>薄壳山核桃黑斑病菌(91.9％)>草莓灰霉病菌(84.5％)>玉米茎腐病菌(79.0％)>大叶黄杨炭疽病菌(66.6％)>瓜炭疽病菌(51.4％)>西瓜枯萎病菌(30.1％)，其中六种病原菌的抑制效果达到50％以上。

15、生物材料保藏信息说明

16、ef-wch-86，在本申请中称作内生真菌ef-wch-86，已于2023年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.40679，保藏单位地址是北京市朝阳区北辰西路一号院三号，邮编：100101，分类命名为麦斑点附球霉epicoccumtritici。

技术特征：

1.一种附球菌属真菌，其特征在于，所述附球菌属真菌命名为ef-wch-86，于2023年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.40679，分类命名为麦斑点附球霉(epicoccum tritici)。

2.一种权利要求1所述的附球菌属真菌的发酵产物，其特征在于，通过将ef-wch-86菌株菌饼接种于pdb培养基，于25-27℃、160-180r/min摇床中黑暗条件下，恒温振荡培养8天，获得发酵培养物，分离菌丝与发酵液，用乙酸乙酯萃取发酵液，得萃取液，经旋转蒸发浓缩后获得发酵液粗提物，即为附球菌属真菌的发酵产物。

3.根据权利要求2所述的附球菌属真菌的发酵产物，其特征在于，乙酸乙酯萃取发酵液的过程为：使用等体积乙酸乙酯萃取，超声半小时，24小时后进行下一次萃取，共3次，合并萃取液。

4.根据权利要求3所述的附球菌属真菌的发酵产物，其特征在于，旋转蒸发浓缩采用温度为40℃。

5.根据权利要求4所述的附球菌属真菌的发酵产物，其特征在于，ef-wch-86菌株菌饼接种于pdb培养基培养条件为25℃、180r/min。

6.一种权利要求1所述的附球菌属真菌或权利要求2-5任一项所述的附球菌属真菌的发酵产物在抑制病原菌中的应用，其特征在于，所述病原菌包括果生炭疽菌(colletotrichum fructicola)、束状刺盘孢(c.dematium)、盘长孢状刺盘孢菌(c.gloeosporioides)、葫芦科刺盘孢(c.orbiculare)、西瓜专化型尖孢镰刀菌(f.oxysporum f.sp.niveum)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)和灰葡萄孢(botrytiscinerea)。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述附球菌属真菌能够用于植物病害防治。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述附球菌属真菌能够用于防治薄壳山核桃黑斑病。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述附球菌属真菌还能够用于防治炭疽病、枯萎病、茎腐病、灰霉病。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述炭疽病包括大叶黄杨炭疽病、香樟炭疽病、瓜炭疽病。

技术总结
本发明涉及植物病害防治技术领域，具体公开了一种附球菌属真菌及其应用，所述附球菌属真菌命名为EF‑WCH‑86，于2023年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.40679。本发明分离获得的附球菌属真菌能够有效抑制薄壳山核桃黑斑病菌果生炭疽菌、大叶黄杨炭疽病菌束状刺盘孢、香樟炭疽病菌盘长孢状刺盘孢菌、瓜炭疽病菌葫芦科刺盘孢、西瓜枯萎病菌西瓜专化型尖孢镰刀菌、玉米茎腐病菌禾谷镰刀菌和草莓灰霉病菌灰葡萄孢，能防治由上述病原菌引起的植物病害。

技术研发人员：彭凡,刘艳雯,张义军
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15