一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽及其制备方法

本发明涉及牡蛎壳综合利用，具体涉及一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽及其制备方法。

背景技术：

1、牡蛎作为第一批被卫生部批准的药食同源食品，其肉质味道鲜美，营养丰富，伴随而生的是大量的占牡蛎整体质量60％以上的牡蛎壳，除了部分用作药材和土壤改良剂以及用于石灰生产外，大多数牡蛎壳被填埋、堆肥和向海洋倾倒等，引起很多环境问题，因此迫切需要新技术手段进行再生资源的利用。

2、由于牡蛎壳中含有85％以上的碳酸钙，以牡蛎壳为原料制备生物钙逐渐引起人们的重视，目前，国内外已成功开发出一系列以牡蛎壳为原料的活性钙粉，但是对牡蛎壳有机质的研究鲜见报道，这无疑阻碍了牡蛎壳资源的进一步开发和利用。由于还含有部分蛋白质，牡蛎贝壳的蛋白质水解液含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸等17种氨基酸，总氨基酸含量为0.15％-0.24％，因此，为了能够更好的应用牡蛎的动物药资源，阐明其药效的化学依据，有必要对其肽类化学成分和活性进行系统的研究，因此，充分利用牡蛎壳资源，制成具有抗氧化活性且易于人体吸收的肽及附加产品具有重要意义。

技术实现思路

1、为了克服上述的技术问题，本发明的目的在于提供一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽及其制备方法，解决了目前缺乏对基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的研究，导致牡蛎壳的综合利用仍然不够理想，限制了牡蛎壳资源的开发和利用的问题。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，包括以下步骤：

4、步骤一：将牡蛎壳用清水清洗干净，放置于真空干燥箱中干燥，得到预处理牡蛎壳；

5、步骤二：将预处理牡蛎壳破碎，加入至球磨罐中，之后加入去离子水并进行球磨，将球磨形成的浆料烘干，过筛，得到牡蛎壳粉末；

6、步骤三：将牡蛎壳粉末、盐酸溶液加入至三口烧瓶中搅拌反应，边搅拌边逐滴加入氢氧化钠溶液，直至ph为10.5-11，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束后将反应产物冷却至室温，真空抽滤，将滤液旋转蒸发至浓稠，之后加入至无水乙醇中搅拌分散，静置，真空抽滤，将滤饼干燥，得到牡蛎壳蛋白；

7、步骤四：将牡蛎壳蛋白、去离子水加入至三口烧瓶中搅拌反应，之后加入蛋白酶发生酶解反应，之后水浴灭酶，反应结束后将反应产物冷却至室温，离心，取上清液，得到牡蛎壳酶解液；

8、步骤五：将牡蛎壳酶解液利用超滤膜逐级超滤，分别得到组分一、组分二、组分三以及组分四，将组分一、组分二、组分三以及组分四分别进行旋转浓缩，之后冷冻干燥，分别得到第一活性肽、第二活性肽、第三活性肽以及第四活性肽，得到四种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽。

9、作为本发明进一步的方案：步骤一中的干燥温度为80-90℃，干燥时间为8-10h。

10、作为本发明进一步的方案：步骤二中的所述预处理牡蛎壳、去离子水的用量比为10g：(35-45)ml。

11、作为本发明进一步的方案：步骤二中的球磨速率为400-500r/min，球磨时间为2-3h，筛孔的孔径为100-150目。

12、作为本发明进一步的方案：步骤三中的所述牡蛎壳粉末、盐酸溶液的用量比为10g：(50-60)ml，所述盐酸溶液的质量分数为36-38％，所述氢氧化钠溶液的质量分数为35-40％。

13、作为本发明进一步的方案：步骤三中的干燥温度为40-45℃，干燥时间为8-10h。

14、作为本发明进一步的方案：步骤四中的所述牡蛎壳蛋白、去离子水以及蛋白酶的用量比为10g：1000ml：(0.2-0.8)g，所述蛋白酶为中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及风味蛋白酶中的一种，所述中性蛋白酶的酶活性为6.3×104u/g，所述胰蛋白酶的酶活性为6.8×104u/g，所述木瓜蛋白酶的酶活性为7.0×104u/g，所述风味蛋白酶的酶活性为7.0×104u/g。

15、作为本发明进一步的方案：步骤四中的酶解反应温度为40-60℃，酶解反应时间为4-5h，水浴灭酶温度为100-105℃，水浴灭酶时间为15-20min，离心速率为4000-5000r/min，离心时间为10-15min。

16、作为本发明进一步的方案：步骤五中的超滤膜截留分子量为10kda、5kda以及3kda，所述组分一的分子量＞10kda，所述组分二的分子量为5-10kda，所述组分三的分子量为3-5kda，所述组分四的分子量＜3kda。

17、本发明还提供一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽，由上述的基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法制备得到。

18、本发明的有益效果：

19、本发明提供了一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽及其制备方法，该制备方法首先将牡蛎壳破碎球磨，经过充分的细化后能够易于将牡蛎壳上的蛋白质进行提取，之后利用盐酸溶液对蛋白质进行溶解，通过调节ph＞蛋白质的等电点，提高了蛋白质在水中的溶解度，使得蛋白质提取效果优良，之后利用多种蛋白酶进行测试，筛选出适用于牡蛎壳上的蛋白质的蛋白酶，从而能够对蛋白质充分酶解，形成活性肽，之后将牡蛎壳酶解液进行逐级超滤，使得具有抗氧化能力的组分得到了浓缩，使得制备得到的抗氧化活性肽的抗氧化性能得到大幅度提升，抗氧化活性肽的制备使得牡蛎壳资源得到充分利用，对牡蛎壳资源的开发和利用具有重要意义。

技术特征：

1.一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤一中的干燥温度为80-90℃，干燥时间为8-10h。

3.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤二中的所述预处理牡蛎壳、去离子水的用量比为10g：(35-45)ml。

4.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤二中的球磨速率为400-500r/min，球磨时间为2-3h，筛孔的孔径为100-150目。

5.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤三中的所述牡蛎壳粉末、盐酸溶液的用量比为10g：(50-60)ml，所述盐酸溶液的质量分数为36-38％，所述氢氧化钠溶液的质量分数为35-40％。

6.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤三中的干燥温度为40-45℃，干燥时间为8-10h。

7.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤四中的所述牡蛎壳蛋白、去离子水以及蛋白酶的用量比为10g：1000ml：(0.2-0.8)g，所述蛋白酶为中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及风味蛋白酶中的一种，所述中性蛋白酶的酶活性为6.3×104u/g，所述胰蛋白酶的酶活性为6.8×104u/g，所述木瓜蛋白酶的酶活性为7.0×104u/g，所述风味蛋白酶的酶活性为7.0×104u/g。

8.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤四中的酶解反应温度为40-60℃，酶解反应时间为4-5h，水浴灭酶温度为100-105℃，水浴灭酶时间为15-20min，离心速率为4000-5000r/min，离心时间为10-15min。

9.根据权利要求1所述的一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，步骤五中的超滤膜截留分子量分别为10kda、5kda以及3kda，所述组分一的分子量＞10kda，所述组分二的分子量为5-10kda，所述组分三的分子量为3-5kda，所述组分四的分子量＜3kda。

10.一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽，其特征在于，由根据权利要求1-9任意一项所述的基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的制备方法制备得到。

技术总结
本发明涉及牡蛎壳综合利用技术领域，具体涉及一种基于牡蛎壳的抗氧化活性肽及其制备方法，用于解决目前缺乏对基于牡蛎壳的抗氧化活性肽的研究，导致牡蛎壳的综合利用仍然不够理想，限制了牡蛎壳资源的开发和利用的问题；该制备方法首先将牡蛎壳充分细化，能够易于将牡蛎壳上的蛋白质进行提取，之后对蛋白质进行溶解，使得蛋白质提取效果优良，之后利用多种蛋白酶进行测试，筛选出适用于牡蛎壳上的蛋白质的蛋白酶，从而能够对蛋白质充分酶解，形成活性肽，之后将牡蛎壳酶解液进行逐级超滤，使得具有抗氧化能力的组分得到了浓缩，提高抗氧化活性肽的抗氧化性能，使得牡蛎壳资源得到充分利用，对牡蛎壳资源的开发和利用具有重要意义。

技术研发人员：彭新颜,于海洋,付学军,贾娜,李银塔
受保护的技术使用者：烟台大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15