一种基于粪便DNA的活体鉴定侏儒蛤性别的方法

本发明属于贝类模式动物性别鉴定，具体涉及一种基于粪便dna的活体鉴定侏儒蛤性别的方法。

背景技术：

1、侏儒蛤(mulinia lateralis)，是一种小型的埋栖贝类，属于双壳纲(bivalvia)、帘蛤目(venerida)、蛤蜊科(mactridae)、骡蛤属(mulinia)，自然分布于加拿大至加勒比海的大西洋沿岸河口和滩涂区域，具有世代周期短、体型小、便于实验室养殖等特点，目前在国内已构建了较为完善的侏儒蛤模式贝的繁育平台。

2、为鉴定得到可靠的侏儒蛤雌雄性别个体，传统方法需要借助显微镜镜检游离配子、性腺组织学切片观察来判断性别。但已有的这些方法都会破坏侏儒蛤的组织，对侏儒蛤造成伤害，不利于繁育工作的开展。因此亟需建立一种对侏儒蛤无损伤、不影响其生长繁殖的活体性别鉴定方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种基于粪便dna的活体鉴定侏儒蛤性别的方法，能方便快捷地鉴定侏儒蛤的性别，且对侏儒蛤不会造成任何损伤，从而有效地解决现有技术中存在的上述问题。

2、本发明首先提供一种侏儒蛤雄性特异性分子标记，包含有：

3、1)核苷酸序列为seq id no:1的分子标记；

4、2)在1)的核苷酸上取代、缺失、添加一个或数个核苷的分子标记；

5、3)与核苷酸序列为seq id no:1的分子标记反向互补的分子标记；

6、本发明另一个方面还提供用于检测上述侏儒蛤雄性特异性分子标记的引物对，所述的引物对能够在雄性侏儒蛤中扩增出特定的片段，而在雌性侏儒蛤中没有扩增片段；

7、作为实施例的具体记载，所述的引物对，其上游引物的序列为seq id no:2，下游引物的序列为seq id no:3；

8、本发明再一个方面提供所述的引物对的一种用途，是在制备用于鉴定侏儒蛤性别的分子检测试剂盒中的应用；

9、本发明还提供一种活体鉴定侏儒蛤性别的方法，所述的方法是从侏儒蛤粪便中提取dna，再使用上述检测侏儒蛤雄性特异性分子标记的引物对进行检测；

10、更进一步的，所述方法，还使用引物对来检测雌雄侏儒蛤共有的分子标记；

11、所述的雌雄侏儒蛤共有的分子标记，其一种核苷酸序列为seq id no:4；

12、所述的检测雌雄侏儒蛤共有的分子标记的引物对，其上游引物的序列为seq idno:5，下游引物的序列为seq id no:6。

13、本发明还提供一种基于粪便dna活体鉴定侏儒蛤性别的分子检测试剂盒，所述试剂盒中包含用于检测雄性特异标记的引物对和用于检测雌雄共有分子标记的引物对。

14、本发明采用雄性特异标记和雌雄共有分子标记对侏儒蛤粪便dna联合pcr，以此鉴定侏儒蛤性别，与其他鉴定方法相比，该方法无需解剖，不会对侏儒蛤造成刺激和组织损伤，也不会影响其生长繁殖，并且操作简单快速，结果稳定可靠。

技术特征：

1.一种侏儒蛤雄性特异性分子标记，其特征在于，所述的侏儒蛤雄性特异性分子标记包含有：

2.一种引物对，其特征在于，所述的引物对用于扩增检测权利要求1所述的侏儒蛤雄性特异性分子标记。

3.如权利要求2所述的引物对，其特征在于，所述的引物对，其上游引物的序列为seqid no:2，下游引物的序列为seq id no:3。

4.权利要求2所述的引物对在制备用于鉴定侏儒蛤性别的分子检测试剂盒中的应用。

5.一种活体鉴定侏儒蛤性别的方法，其特征在于，所述的方法是从侏儒蛤粪便中提取dna，再使用权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的引物对进行检测。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法还使用引物对来检测雌雄侏儒蛤共有的分子标记。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的雌雄侏儒蛤共有的分子标记的核苷酸序列为seq id no:4。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的核苷酸序列为seq id no:4的雌雄侏儒蛤共有的分子标记，其检测引物对中上游引物的序列为seq id no:5，下游引物的序列为seq id no:6。

9.一种基于粪便dna活体鉴定侏儒蛤性别的分子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含用于检测权利要求1所述的侏儒蛤雄性特异性分子标记的引物对。

10.如权利要求9所述的分子检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包含有用于检测雌雄侏儒蛤共有的分子标记的的引物对。

技术总结
本发明提供一种基于粪便DNA的活体鉴定侏儒蛤性别的方法，能方便快捷地鉴定侏儒蛤的性别，且对侏儒蛤不会造成任何损伤。所检测的侏儒蛤雄性特异性分子标记，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。所述的方法是从侏儒蛤粪便中提取DNA，再使用检测侏儒蛤雄性特异性分子标记的引物对进行检测。本发明采用雄性特异标记和雌雄共有分子标记对侏儒蛤粪便DNA联合PCR，以此鉴定侏儒蛤性别，与其他鉴定方法相比，该方法无需解剖，不会对侏儒蛤造成刺激和组织损伤，也不会影响其生长繁殖，并且操作简单快速，结果稳定可靠。

技术研发人员：张玲玲,李国庆,李亚娟,杨亚信,王师,包振民
受保护的技术使用者：中国海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15