一种烟粉虱解毒代谢相关基因的EST-SSR分子标记与应用

本发明涉及烟粉虱解毒代谢相关基因的est-ssr分子标记开发，更具体地说是涉及基于烟粉虱转录组序列开发获得解毒代谢相关基因的est-ssr分子标记及应用。

背景技术：

1、烟粉虱是一种世界性的重要的农业害虫，烟粉虱的为害通常为：吸食植物叶片的细胞造成植物叶片的生理性受损；分泌蜜露造成叶片的煤污病，导致叶片光合作用受阻从而影响作物的生长；烟粉虱造成的生理受损可使植株的生理生化指标产生变化；携带植物病毒病。烟粉虱传播植物双生病毒是烟粉虱对农业产业威胁的重要原因，尤其是对棉花、蔬菜产业具有较大的威胁，双生病毒组对经济作物如棉花、烟草、番茄、木薯等会造成毁灭性危害。田间防控烟粉虱依然以化学防治为主，而烟粉虱极易对杀虫剂产生抗药性，且已有较多研究报道烟粉虱的抗性发生，烟粉虱的抗药性监测对于延缓烟粉虱的抗性发生尤为重要。

2、昆虫的抗药性的发生实际上是生物的适应性进化的现象，杀虫剂造成的药剂选择压是导致抗性进化的主要动力，而昆虫对杀虫剂产生抗性，实际上是杀虫剂对昆虫种群的定向选择的结果，抗性个体被保留同时抗性基因在种群中被积累、遗传和保留的过程。对于昆虫的抗药性与遗传多样性相关性研究，常用的技术手段是通过室内汰选得到相关种群后开展遗传多样性的研究，最终定位到基因，开展遗传分化的研究，或者通过筛选突变靶标位点，找到与杀虫剂的抗性相关性，最终研究种群的遗传分化。

3、基于转录组测序所开发的est-ssr标记与功能基因可以直接相关，从而避免文库构建和筛选，直接反映转录区域的差异。目前已有许多生物学软件用于est-ssr引物的开发，如microsatellite identification tool(misa)，tandem repeat finder(trf)等。基于转录组的标记的开发在动植物遗传育种的应用广泛，如在杜仲、樱桃、甘薯、黑麦、棉花等作物的应用，但在昆虫中的应用较少，尤其是针对入侵性昆虫，且尚未有利用转录组注释与功能基因结合开发的相关报道。

4、因此，使用est-ssr是可以验证田间杀虫剂选择压会导致抗性个体的积累从而造成种群的抗性的遗传分化，可以为烟粉虱的抗药性相关研究提供保证，同时通过对转录组不同测序得到的相关基因进行注释，能够明确基因功能，可直接揭示烟粉虱的功能基因的遗传分化结构，为烟粉虱的抗药性机制研究提供新的思路。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明基于烟粉虱转录组注释，定位解毒代谢相关基因，并挖掘含有ssr位点的基因，开展est-ssr引物的开发与应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种烟粉虱解毒代谢相关基因的est-ssr分子标记：

4、p4506a14-f：5’-aggtactccgtaatgcaccg-3’，如seq id no.1所示；

5、p4506a14-r：5’-aaaccttttcccattaatgcac-3’，如seq id no.2所示；

6、p4504c1-like-f：5’-ggctggctctactggatgtc-3’，如seq id no.5所示；

7、p4504c1-like-r：5’-ttctcgaagtgcgacaagtg-3’，如seq id no.6所示；

8、p450 cyp6em1-f：5’-gaccagtgcaactgacccat-3’，如seq id no.7所示；

9、p450 cyp6em1-r：5’-tgaggtttgcaatgatggaa-3’，如seq id no.8所示；

10、p4506k1-f：5’-ccttgcagttgttgtaagcg-3’，如seq id no.11所示；

11、p4506k1-r：5’-caggtgccgaaaacatttct-3’，如seq id no.12所示；

12、esterasefe4-like-f：5’-cggtgcaggactatccaaat-3’，如seq id no.15所示；

13、esterasefe4-like-r：5’-gcatcagaggctgcatcata-3’，如seq id no.16所示。

14、优选地，不同烟粉虱种群对吡虫啉与倍内威的抗药性倍数与esterase fe4-lik，p4506k1和p4506a14的表达量之间相关性显著，对高效氯氟氰菊酯的抗药性倍数与p4506k1和p4504c1-like的相对表达量相关性显著。

15、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护所述的分子标记在制备鉴定烟粉虱抗药性试剂盒中的应用。

16、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种烟粉虱解毒代谢相关基因的ssr分子标记，为研究烟粉虱抗药性提供了理论支持，同时，通过相关靶点，可以研发相关防治药剂，为烟粉虱的防治和研究种群的遗传分化提供了理论基础。

技术特征：

1.一种烟粉虱解毒代谢相关基因的est-ssr分子标记，其特征在于，所述分子标记引物对包括：

2.根据权利要求1所示的烟粉虱解毒代谢相关基因的est-ssr分子标记，其特征在于，不同烟粉虱种群对吡虫啉与倍内威的抗药性倍数与esterase fe4-lik，p4506k1和p4506a14的表达量之间相关性显著，对高效氯氟氰菊酯的抗药性倍数与p4506k1和p4504c1-like的相对表达量相关性显著。

3.权利要求1或2所述的分子标记在制备鉴定烟粉虱抗药性试剂盒中的应用。

技术总结
本发明公开了一种烟粉虱解毒代谢相关基因的EST‑SSR分子标记、引物及应用，其中，分子标记的引物包括：SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.6SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15～SEQ ID NO.16所示的引物，以这些引物对对待测样品进行扩增，可验证田间杀虫剂选择压会导致抗性个体的积累从而造成种群的抗性的遗传分化，可以应用于烟粉虱的抗药性分子监测，及时发现烟粉虱区域性抗性发生，为烟粉虱的抗性综合治理提供理论基础。

技术研发人员：郭文超,贾尊尊,付开赟,吐尔逊·阿合买提,丁新华,姜卫华,王小武,孙健博,叶晓琴
受保护的技术使用者：新疆农业科学院植物保护研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15