樟树CcNRAMP2在促进镉吸收和积累中的应用的制作方法

本发明属于基因工程，尤其涉及樟树ccnramp2在促进镉吸收和积累中的应用。

背景技术：

1、镉(cadmium,cd)是我国土壤的首要无机污染物。植物中的cd积累会抑制其生长，甚至死亡。植物中的cd也通过食物链被人体所吸收而影响人体健康。一些快速生长的木本植物，如杨树、柳树、樟树和大叶相思，具有高生物量、对重金属具有高耐受性，在cd污染土壤中表现出吸收cd的巨大潜力，在cd污染土壤修复中的作用和重要性日益受到关注。因此，速生木本植物在植物修复领域具有较大的潜在价值。

2、随着环境污染问题的日益严重，寻找能够抵抗cd胁迫并且能降低土壤中cd含量的功能基因已经成为关系人民生活和健康的大事，对于发掘cd富集林木新种质具有重要科学意义和应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供樟树ccnramp2在促进镉吸收和积累中的应用，以解决上述技术问题。

2、本发明目的之一在于提供：樟树ccnramp2在促进镉吸收和积累中的应用，樟树ccnramp2的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示。

3、本发明目的之二在于提供：含有樟树ccnramp2的重组载体，重组载体为微生物表达载体pyes2-ccnramp2和/或植物表达载体pcambia3300-ccnramp2。

4、优选的，工程菌为含有pyes2-ccnramp2重组载体的酵母菌和/或含有pcambia3300-ccnramp2的农杆菌。

5、本发明目的之三在于提供：樟树ccnramp2在促进酵母菌或樟树叶片镉吸收和积累中的应用，樟树ccnramp2的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示。

6、本发明的原理和有益效果在于：

7、1、本发明涉及的ccnramp2基因，通过遗传转化技术过量表达自然抗性相关巨噬细胞蛋白(natural resistance associated macrophage protein,nramp)ccnramp2，可以显著促进微生物酵母菌及植物樟树叶片对镉的吸收和积累，显著提高了微生物酵母菌、农杆菌及植物樟树叶片对于cd的耐受能力。本发明提供的应用，既可为木本植物开展cd污染修复提供重要候选基因，又可利用现代生物技术培育cd富集林木新种质提供科学依据，具有较高的应用价值和研究价值。

8、2、本发明从樟树中克隆得到的ccnramp2具有cd转运活性，并在酵母菌和樟树叶片中促进cd吸收和积累的应用，有助于深入了解樟树nramp基因家族在重金属离子吸收转运中的生物学功能，也可以作为木本植物开展cd污染修复的重要候选基因，以及利用现代生物技术培育cd富集林木新种质提供科学依据。

9、3、樟树ccnramp2的核苷酸长度为1632bp，编码543个氨基酸，蛋白质分子量约为59.05kd，含33个酸性氨基酸，40个碱性氨基酸，理论等电点pi为8.85，脂溶性系数为119.80，蛋白质疏水性系数为0.604。ccnramp2蛋白含α-螺旋53.59％，β-折叠12.89％，β-转角2.03％和无规则卷曲31.49％。此外，ccnramp2蛋白中的nramp结构域存在于62-424位点，含有12个跨膜区域，利于细胞膜内、外信息传递与交流。

技术特征：

1.樟树ccnramp2在促进镉吸收和积累中的应用，其特征在于，樟树ccnramp2的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.含有权利要求1所述的樟树ccnramp2的重组载体，其特征在于，重组载体为微生物表达载体pyes2-ccnramp2和/或植物表达载体pcambia3300-ccnramp2。

3.含有权利要求2所述的樟树ccnramp2的重组载体的工程菌，其特征在于，工程菌为含有pyes2-ccnramp2重组载体的酵母菌和/或含有pcambia3300-ccnramp2的农杆菌。

4.樟树ccnramp2在促进酵母菌或樟树叶片镉吸收和积累中的应用，其特征在于，樟树ccnramp2的核苷酸序列如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示。

技术总结
本发明属于基因工程技术领域，具体公开了樟树CcNRAMP2在促进镉吸收和积累中的应用，樟树CcNRAMP2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的应用，既可为木本植物开展镉污染修复提供重要候选基因，又可利用现代生物技术培育镉富集林木新种质提供科学依据，具有较高的应用价值和研究价值。

技术研发人员：张桂华,岳春雷,李贺鹏,施晓灯
受保护的技术使用者：浙江省林业科学研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16