一种展示新冠病毒S蛋白的融合蛋白和重组病毒粒子及其应用的制作方法

本发明属于生物制品，具体涉及一种展示新冠病毒s蛋白的融合蛋白以及重组病毒粒子及其应用。

背景技术：

1、新冠病毒的免疫原性相对较弱，在以活病毒为载体构建疫苗株时，理想情况下，希望病毒粒子表面或被病毒感染进而表达细胞膜抗原的细胞表面有更多的抗原蛋白展示。新冠病毒的s蛋白是病毒与宿主细胞膜受体ace2结合，进而感染宿主细胞的关键蛋白。s蛋白属于i型跨膜蛋白，其在细胞膜上的表达量与跨膜区氨基酸排列有关。以新城疫(newcastledisease virus,ndv)病毒新型冠状重组疫苗株为例，前期研究发现，将新型冠状病毒(sars-cov-2)的s蛋白的跨膜结构域和胞内结构域更换为ndv f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域后所拯救得到的重组ndv-covs-f病毒，其免疫原性比原始s蛋白直接插入ndv病毒载体所形成的重组病毒更好。然而，将s蛋白的跨膜结构域和胞内结构域更换为ndv f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域，有极大可能使得s蛋白的上膜与ndv病毒本身f蛋白的上膜形成竞争关系，干扰细胞膜上抗原蛋白的表达或者病毒组装，影响其免疫原性。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种展示新冠病毒s蛋白的融合蛋白和构建的相应重组病毒及其应用。

2、本发明提供了一种展示新冠病毒s蛋白的融合蛋白，包含新冠病毒s蛋白的胞外域序列和含禽副黏病毒科病毒f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域的序列。

3、优选的，所述禽副黏病毒科病毒包括以下一种或几种血清型：apmv-2、apmv-3、apmv-4、apmv-5、apmv-6、apmv-7、apmv-8、apmv-9、apmv-10、apmv-11或apmv-12；

4、优选的，所述禽副黏病毒科病毒包括以下一种或几种血清型：apmv-3、apmv-5、apmv-7和apmv-8血清型。

5、优选的，所述新冠病毒s蛋白的胞外结构域来源于新冠原始毒株或变异株。

6、优选的，所述新冠病毒s蛋白的胞外结构域序列还包括以下一种或几种蛋白编码序列：s2p，s6p，s2p/gsas；

7、所述s2p是将所述新冠病毒s蛋白胞外域进行k986p和v987p突变所形成的蛋白编码序列；

8、所述s2p/gsas蛋白编码序列是在s2p基础上将第682～685位氨基酸rrar突变为gsas所形成的蛋白编码序列；

9、所述s6p蛋白编码序列是在s2p基础上进行f817p、a892p、a899p和a942p突变所形成的蛋白编码序列。

10、本发明提供了一种编码所述融合蛋白的融合基因。

11、本发明提供了一种包含所述融合基因的重组病毒载体。

12、优选的，所述重组病毒载体以新城疫病毒载体为骨架载体。

13、优选的，所述融合基因以表达盒子形式插入新城疫病毒载体的p基因和m基因之间。

14、本发明提供了一种由所述重组病毒载体制备得到的重组病毒粒子或疫苗株。

15、本发明提供了所述融合蛋白、所述融合基因、所述重组病毒载体或所述重组病毒粒子或疫苗株在制备防控新冠病毒所致疾病的疫苗中的应用。

16、本发明提供的一种展示新冠病毒s蛋白的融合蛋白，包括新冠病毒s蛋白的胞外域序列和禽副黏病毒科f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域编码序列。本发明采用禽副黏病毒科f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域序列替换新冠病毒s蛋白的原始跨膜结构域和胞内结构域后形成的融合蛋白可以解决以下技术问题：1)避免融合蛋白的上膜与新城疫病毒f蛋白的上膜形成竞争关系；2)提高了融合蛋白或重组新城疫病毒免疫小鼠后产生中和抗体的能力，减弱了融合蛋白或重组新城疫病毒产生垃圾抗体的能力，极大地增强了免疫原性。可见，s蛋白的胞外域编码序列和apmv病毒科病毒(除ndv外)f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域编码序列相融合所产生的融合基因或蛋白，具有成为优秀新冠疫苗候选抗原的巨大潜力。

17、进一步的，本发明具体限定了apmv病毒科病毒的种类，其中融合蛋白s2p-ap3(aa3)、s2p-ap5、s2p-ap7、s2p-ap8或其编码基因都具有优异的免疫原性，可用于防控新冠病毒所致疾病的疫苗的制备。

技术特征：

1.一种展示新冠病毒s蛋白的融合蛋白，其特征在于，包含新冠病毒s蛋白的胞外域序列和含禽副黏病毒科病毒f蛋白的跨膜结构域和胞内结构域的序列；

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述新冠病毒s蛋白的胞外结构域来源于新冠原始毒株或变异株。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述新冠病毒s蛋白的胞外结构域序列还包括以下一种或几种蛋白编码序列：s2p，s6p，s2p/gsas；

4.一种编码权利要求1～3任意一项所述融合蛋白的融合基因。

5.一种包含权利要求4所述融合基因的重组病毒载体。

6.根据权利要求5所述重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体以新城疫病毒载体为骨架载体。

7.根据权利要求6所述重组病毒载体，其特征在于，所述融合基因以表达盒子形式插入所述新城疫病毒载体的p基因和m基因之间。

8.一种由权利要求5～7任一项所述重组病毒载体制备得到的重组病毒粒子或疫苗株。

9.权利要求1～3任意一项所述融合蛋白、权利要求4所述融合基因、权利要求5～7任意一项所述重组病毒载体或权利要求8所述重组病毒粒子或疫苗株在制备防控新冠病毒所致疾病的疫苗中的应用。

技术总结
本发明提供了一种展示新冠病毒S蛋白的融合蛋白和重组病毒粒子及其应用，本发明属于生物制品技术领域。本发明提供了一种表达新冠病毒S蛋白的融合基因及融合蛋白，该融合基因或融合蛋白包含新冠病毒S蛋白的胞外结构域序列与禽副黏病毒科F蛋白的跨膜结构域和胞内结构域序列。同时，含有该序列的重组NDV病毒具有较强的中和抗体的能力。可见，S蛋白的胞外域编码序列和APMV病毒科病毒(除NDV外)F蛋白的跨膜结构域和胞内结构域编码序列相融合所产生的融合基因或蛋白，具有成为优秀新冠疫苗候选抗原的巨大潜力。

技术研发人员：陈瑞婷,孙慧敏,毛水花,周孟云,宋家升
受保护的技术使用者：浙江迪福润丝生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15