用于粪便中幽门螺杆菌核酸提取样本前处理的试剂和方法与流程

本发明涉及医学检验领域，特别是涉及用于粪便样本中幽门螺杆菌核酸提取的前处理的试剂以及使用方法。

背景技术：

1、幽门螺杆菌（ helicobacter pylori，hp）作为一种全球感染超过50%的细菌，受到了世界卫生组织（who）的密切关注，是who规定ⅰ类致癌因子。hp与胃部许多疾病相关，包括胃炎、胃溃疡、萎缩性胃炎、胃粘膜组织相关淋巴瘤（malt淋巴瘤）、胃癌。筛查和治疗hp感染是胃癌的一级预防措施。

2、幽门螺杆菌的检测方法有13c/14c尿素呼气试验、快速尿素酶试验（rut）、血清抗体检测、组织染色、核酸扩增方法。以上方法中，血清学检测，不能代表正在感染，尿素呼气试验、rut、组织染色等方法，不能给出抗生素敏感性结果，基于胃黏膜的核酸检测方法，需要胃镜下取胃黏膜，为有创操作。针对大规模的人群筛查以及临床治疗需求，迫切需要一种能检测hp并能给出耐药信息的无创检测方法。

3、粪便样本作为一种hp检测标本受到了肯定，我国食品药品监督管理局（npma）批准了5款粪便hp抗原检测的试剂盒，一款粪便hp扩增的试剂盒。采用粪便样本，进行hp核酸检测，能够同时给出感染和耐药的信息，样本采集无创，检测通量高，能够适应大规模人群的筛查。然而粪便hp检测的难度在于核酸提取，由于粪便中存在大量的杂质，影响hp核酸的提取效率，并且一些杂质成分会进一步抑制pcr的扩增，因此粪便hp核酸提取的关键在于样本前处理，去除其中的杂质成分。目前市场上的粪便核酸提取试剂盒，都是针对粪便中总的微生物的核酸提取，没有充分考虑到hp提取的需求。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题为：提供一种用于粪便样本幽门螺杆菌核酸提取的前处理的试剂及方法，以提高hp核酸提取的浓度和纯度。

2、本发明的技术方案为：一种用于粪便样本幽门螺杆菌核酸提取的前处理的试剂，包括buffer a和固体吸附剂b，其中，所述buffer a为含有1.0~5.0％（m/v）pvp和1.0~5.0％（m/v）ctab的ph为8.0的tris-hcl溶液；所述固体吸附剂b为活性炭，所述活性炭的比表面积为500~1000m2/g，孔径分布为2~50nm。

3、利用上述所述的试剂对粪便样本进行前处理的方法，包括如下步骤：

4、（1）取粪便样本，置于离心管中，加入buffer a，振荡混匀，室温下静置；

5、（2）将步骤（1）静置后的混合液离心，取上清液；

6、（3）向步骤（2）的上清液中加入固体吸附剂b，振荡混匀，静置；

7、（4）将步骤（3）静置后的混合液离心，取上清液用于下游核酸提取。

8、进一步地，步骤（2）中，所述离心的条件为1600rpm 离心5min。

9、进一步地，步骤（4）中，所述离心的条件为2000rpm 离心5min。

10、pvp能与粪便中的多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除dna中酚的污染，ctab裂解细胞，沉淀蛋白和中性多糖，去除粪便中的植物多糖，活性炭固体吸附剂能够进一步过滤粪便中的杂质，通过3种物质的复合作用，能够充分去除粪便中的杂质和pcr抑制物，有利于后续核酸获得高纯度的产物。

11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

12、采用本发明的试剂和方法处理的粪便样本，提高了后续hp核酸提取的浓度和纯度，后续pcr扩增ct值更小。

技术特征：

1.一种粪便样本幽门螺杆菌核酸提取样本前处理试剂，其特征在于，包括buffer a和固体吸附剂b，其中，所述buffer a为含有质量浓度10~50 g/l的pvp和10~50 g/l的ctab的ph为8.0的tris-hcl溶液；所述固体吸附剂b为活性炭，所述活性炭的比表面积为500~1000m2/g，孔径分布为2~50nm。

2.利用权利要求1所述的试剂对粪便样本进行前处理的方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述离心的条件为1600rpm 离心5min。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述离心的条件为2000rpm 离心5min。

技术总结
本发明公开了一种用于粪便中幽门螺杆菌核酸提取样本前处理的试剂和方法，所述试剂包括Buffer A和固体吸附剂B，其中，所述Buffer A由1.0~5.0％PVP和1.0~5.0％CTAB组成，pH值为8.0；所述固体吸附剂B为活性炭。采用本发明的试剂和方法处理的粪便样本，能够很好的去除粪便中的杂质和PCR抑制剂，能够提高粪便核酸提取后幽门螺杆菌核酸检测的效率。

技术研发人员：刘国栋,王琦,王南苗
受保护的技术使用者：苏州长柏生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15