一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记及其应用的制作方法

本发明属于油菜育种，具体涉及一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记及其应用。

背景技术：

1、油菜籽是国产植物油的第一大来源，提高国产油菜籽总供应量具有重要意义。我国北纬34°～35°以北广阔区域，气候冷凉、光照充足，有巨大油菜生产潜力。北方地区冬油菜的种植不仅可以提高我国粮油产量，而且冬油菜可增加地表植被覆盖，减少沙尘等天气。由于冬季低温的限制仅有抗寒性强的白菜型油菜可越冬，但白菜型油菜存在不抗倒、品质差、产量低等诸多缺陷。而甘蓝型油菜恰好可以解决此缺点，可解决我国目前农村劳动力减少、提高油菜品质等问题。目前，甘蓝型冬油菜生产主要问题在于抗寒性弱于白菜型油菜，因此选育更加抗寒的甘蓝型冬油菜是关键。

2、传统的作物育种，通常面临选育时间长、不良性状遗传等问题。随着生物技术发展，分子标记技术作为新时代的产物，因其具有准确、快速及不受环境影响等优势被用作育种中辅助选择的重要方法。目前，分子标记通过三代的发展，已有20多种，相比玉米、小麦等作物，分子标记在油菜中的引用较晚，油菜育种中常用到rapd、aflp、srap、scar等标记。目前，众多的分子标记中，当属建立在pcr基础上的第二代分子标记产物ssr标记和第三代分子标记产物snp标记运用最多、最广。其中，snp标记发展前景更为广阔。例如，中国专利cn201911212010.7通过油菜bnfad2基因高油酸等位突变及其snp标记引物的开发，得到了油酸含量高达88％的高油酸油菜材料；还如中国专利cn201910521682.3通过甘蓝型油菜主花序角果数性状、snp分子标记开发及应用，快速选择主花序角果数目标性状；再如，中国专利cn201510502589.x公开了一种甘蓝型油菜抗根肿病基因pbbas.1的分子标记及其在抗根肿病育种中的应用，提高抗根肿病基因选育的速度与鉴定效率。利用snp等标记开发进行目标种质快速选择的研究取得一定的进展，但是目前没有关于开发分子标记，筛选抗寒甘蓝型油菜的记载。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记，对甘蓝型油菜进行抗寒性鉴定，鉴定出强抗寒性甘蓝型油菜品种，加快强抗寒性甘蓝型油菜的选育进程。

2、本发明提供了一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记，所述分子标记位于甘蓝型油菜的c07染色体的第29519600位碱基～第29519611位碱基；

3、所述第29519600位碱基～第29519611位碱基的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明还提供了一种甘蓝型油菜抗寒性状的dar5基因突变体模型，所述dar5基因突变体模型包括c.1201_1212delaaaaaccatgtt。

5、本发明还提供了一种检测上述技术方案所述分子标记或dar5基因突变体模型的引物，包括上游引物f1和下游引物r1；

6、所述上游引物f1包括如seq id no.4所示的核苷酸序列；

7、所述下游引物r1包括如seq id no.5所示的核苷酸序列。

8、本发明还提供了上述技术方案所述的引物在制备检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性的试剂盒中的应用。

9、本发明还提供了一种检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性的试剂盒，包括上述技术方案所述的引物。

10、本发明还提供了上述技术方案所述分子标记或dar5基因突变体模型或试剂盒在检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性中的应用。

11、本发明还提供了上述技术方案所述分子标记或dar5基因突变体模型或引物或试剂盒在甘蓝型油菜抗寒育种中的应用。

12、本发明还提供了上述技术方案所述分子标记或dar5基因突变体模型或引物或试剂盒在辅助选择甘蓝型油菜抗寒性分子标记中的应用。

13、本发明还提供了一种鉴别甘蓝型油菜抗寒性的方法，包括如下步骤：

14、利用上述技术方案所述的引物对待检测材料的dna进行pcr扩增；

15、若pcr扩增产物显示单一条带则为弱抗寒性甘蓝型油菜；

16、若pcr扩增产物显无条带则为强抗寒性甘蓝型油菜。

17、优选的，所述pcr扩增的反应体系以20μl计，由5μl模板dna，2μl 10×taq buffer，1.6μl mg2+，0.4μl dntp，0.3μltaq dna聚合酶，1μl上游引物，1μl下游引物和8.7μl ddh2o组成；

18、所述pcr扩增的程序为95℃预变性5min；95℃变性30s，49-50℃退火45s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸7min；4℃保存。

19、有益效果：

20、本发明对强抗寒甘蓝型油菜自交系材料17nts57和弱抗寒自交系材料cy12pxw进行基因克隆测序分析，发现两种抗寒性材料c07染色体的第29519600位碱基～第29519611位碱基存在差异位点，具体如seq id no.1所示(5’-aaaaaccatgtt-3’)，并且根据这一差异位点设计特异引物，进行pcr扩增，发现强抗寒材料扩增结果显示条带，弱抗寒材料没有条带生成。本发明提供的分子标记可以用于鉴定强抗寒性甘蓝型油菜品种，加快强抗寒性甘蓝型油菜的选育进程。

技术特征：

1.一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于甘蓝型油菜的c07染色体的第29519600位碱基～第29519611位碱基；

2.一种甘蓝型油菜抗寒性状的dar5基因突变体模型，其特征在于，所述dar5基因突变体模型包括c.1201_1212delaaaaaccatgtt。

3.一种检测权利要求1所述分子标记或权利要求2所述dar5基因突变体模型的引物，其特征在于，包括上游引物f1和下游引物r1；

4.权利要求3所述的引物在制备检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性的试剂盒中的应用。

5.一种检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的引物。

6.权利要求1所述分子标记或权利要求2所述dar5基因突变体模型或权利要求5所述的试剂盒在检测和/或鉴别甘蓝型油菜抗寒性中的应用。

7.权利要求1所述分子标记或权利要求2所述dar5基因突变体模型或权利要求3所述的引物或权利要求5所述的试剂盒在甘蓝型油菜抗寒育种中的应用。

8.权利要求1所述分子标记或权利要求2所述dar5基因突变体模型或权利要求3所述的引物或权利要求5所述的试剂盒在辅助选择甘蓝型油菜抗寒性分子标记中的应用。

9.一种鉴别甘蓝型油菜抗寒性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应体系以20μl计，由5μl模板dna，2μl 10×taq buffer，1.6μl mg2+，0.4μl dntp，0.3μl taq dna聚合酶，1μl上游引物，1μl下游引物和8.7μl ddh2o组成；

技术总结
本发明属于油菜育种技术领域，具体涉及一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记及其应用。本发明提供了一种与甘蓝型油菜抗寒性状相关的分子标记，所述分子标记位于甘蓝型油菜的C07染色体的第29519600位碱基～第29519611位碱基；所述第29519600位碱基～第29519611位碱基的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明根据这一差异位点设计特异引物，进行PCR扩增，发现强抗寒材料扩增结果显示条带，弱抗寒材料没有条带生成。本发明提供的分子标记可以用于鉴定强抗寒性甘蓝型油菜品种，加快强抗寒性甘蓝型油菜的选育进程。

技术研发人员：曹小东,王灏,尚丽平,李保军,赵亚军,梁佩萱,刘自刚
受保护的技术使用者：陕西省杂交油菜研究中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15