CpG寡聚脱氧核苷酸、包含其的佐剂、疫苗及应用的制作方法

本发明属于佐剂，特别涉及一种cpg寡聚脱氧核苷酸、包含其的佐剂、疫苗及应用。

背景技术：

1、cpg寡聚脱氧核苷酸(cpg odn，cpg oligodeoxynucleotide)是一类由人工合成的、含cpg二核苷酸基序的非甲基化脱氧寡核苷酸，是细胞内模式识别受体tlr9(toll-likereceptor 9)的激动剂。cpg odn与tlr9结合后，激活下游信号级联反应，促进b细胞、浆细胞样树突状细胞(pdc)t细胞等细胞的活化，因此具有疫苗佐剂的潜力。

2、cn112156183a公开了一种cpg复合佐剂，包括聚乳酸类纳微球和免疫刺激剂，免疫刺激剂包括cpg odn，cpg odn偶联在聚乳酸类纳微球表面。该cpg复合佐剂作为新型冠状病毒疫苗佐剂能够有效增强抗原所诱导的细胞免疫及体液免疫应答；cn113304257a公开了一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗，新型冠状病毒灭活原液按规定的同一蛋白质含量或抗原含量进行配制后，添加cpg佐剂和铝佐剂制得，该疫苗可以有效提高当前铝佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的血清效价和中和抗体水平；同时有效降低抗原用量，同时降低生产成本，提高疫苗产率；cn115845042a公开了重组新型冠状病毒s蛋白三聚体疫苗组合物及其应用。该疫苗组合物含有重组新型冠状病毒s蛋白三聚体和免疫佐剂(cpg佐剂和/或铝佐剂)，能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。cn114569714b公开了一种新型冠状病毒灭活疫苗用复合佐剂，包括纳米铝制剂，还包括cpg odn，可显著提高新型冠状病毒灭活疫苗的免疫原性。cn 115252772 a公开了一种组合物，其包含cpg odn和一种或多种与所述免疫调节性cpg odn共同发挥作用的其他佐剂，例如铝佐剂，cpg佐剂与铝佐剂联用时产生了协同增效作用，双佐剂疫苗比单一佐剂疫苗显示出更好的免疫原性。

3、cpg odn作为一种新型高效的免疫激活剂，将其应用于提高新型冠状病毒疫苗的免疫原性方面成为近来新型冠状病毒疫苗研究的热点。然而cpg odn对不同的种属、细胞和抗原成分体现出不同的免疫刺激效果，其免疫刺激效果也与其序列结构紧密相关。因此，有必要对cpg odn做出相应的改进和设计以适应不同的应用场景和抗原成分。

技术实现思路

1、鉴于现有技术的不足，本发明提供一种cpg寡聚脱氧核苷酸、包含其的佐剂、疫苗及应用。

2、本发明的一方面，提供一种cpg寡聚脱氧核苷酸，其具有如seq id no.1～8任一所示的核苷酸序列；或者，具有如seq id no:8所示的核苷酸序列经取代或增加一个或多个核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列。优选地，其具有如seq id no.1～10任一所示的核苷酸序列。优选地，cpg寡聚脱氧核苷酸的一个或多个核苷酸为硫代修饰；更优选地，cpg寡聚脱氧核苷酸的全部核苷酸均为硫代修饰，硫代修饰可以提高cpg odn对核酸酶的抵抗作用。

3、本发明的另一方面，提供一种佐剂，其包含前述cpg寡聚脱氧核苷酸。优选地，佐剂还包含铝盐，优选为氢氧化铝。

4、本发明的另一方面，提供一种疫苗，其包含抗原和前述佐剂。抗原为微生物抗原或自身抗原；微生物抗原选自细菌抗原、病毒抗原以及寄生虫抗原中的任意一种，优选为病毒抗原；病毒抗原优选为新型冠状病毒的重组蛋白抗原，更优选为omicron ba.4/5-delta株重组新型冠状病毒蛋白。当疫苗包含omicronba.4/5-delta株重组新型冠状病毒蛋白、cpg寡聚脱氧核苷酸以及铝佐剂时，蛋白终浓度为45～55μg/ml，铝浓度为0.4～0.6mg/ml，cpg寡聚脱氧核苷酸的浓度为45～55μg/ml；优选地，蛋白终浓度为50μg/ml，铝浓度为0.5mg/ml，cpg寡聚脱氧核苷酸的浓度为50μg/ml。

5、本发明的另一方面，提供前述cpg寡聚脱氧核苷酸、佐剂在制备疫苗中的用途。

6、本发明的有益效果为：

7、动物实验证实了，含有本发明cpg寡聚脱氧核苷酸的疫苗，第二针免疫14天小鼠血清gmt检测结果显示具有较高igg结合抗体水平，明显优于阴性对照和阳性对照，且该效果与cpg寡聚脱氧核苷酸特定的碱基序列有关。以上结果证实了，本发明cpg寡聚脱氧核苷酸应用于疫苗制备中可以明显增强疫苗免疫原性，减少免疫针次，降低抗原使用量，具有较好的疫苗佐剂效果。

技术特征：

1.cpg寡聚脱氧核苷酸，其特征在于，其具有如seq id no.1～8任一所示的核苷酸序列；或者，具有如seq id no:8所示的核苷酸序列经取代或增加一个或多个核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述cpg寡聚脱氧核苷酸，其特征在于，其具有如seq id no.1～10任一所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述cpg寡聚脱氧核苷酸，其特征在于，所述cpg寡聚脱氧核苷酸的一个或多个核苷酸为硫代修饰；优选地，所述cpg寡聚脱氧核苷酸的全部核苷酸均为硫代修饰。

4.佐剂，其特征在于，其包含权利要求1～3之一所述cpg寡聚脱氧核苷酸。

5.根据权利要求4所述佐剂，其特征在于，所述佐剂还包含铝盐；优选地，所述铝盐为氢氧化铝。

6.疫苗，其特征在于，其包含抗原和权利要求4或5所述佐剂。

7.根据权利要求6所述疫苗，其特征在于，所述抗原为微生物抗原或自身抗原；

8.根据权利要求7所述疫苗，其特征在于，所述抗原为omicronba.4/5-delta株重组新型冠状病毒蛋白。

9.根据权利要求8所述疫苗，其特征在于，所述疫苗包含omicronba.4/5-delta株重组新型冠状病毒蛋白、cpg寡聚脱氧核苷酸以及铝佐剂时，蛋白终浓度为45～55μg/ml，铝浓度为0.4～0.6mg/ml，cpg寡聚脱氧核苷酸的浓度为45～55μg/ml；

10.权利要求1～3之一所述cpg寡聚脱氧核苷酸，或权利要求4或5所述佐剂在制备疫苗中的用途。

技术总结
本发明公开了一种CpG寡聚脱氧核苷酸，其具有如SEQ ID NO.1～8任一所示的核苷酸序列；或者，具有如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列经取代或增加一个或多个核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列。本发明的有益效果为：动物实验证实了，含有本发明CpG寡聚脱氧核苷酸的疫苗，第二针免疫14天小鼠血清GMT检测结果显示具有较高IgG结合抗体水平，明显优于阴性对照和阳性对照，且该效果与CpG寡聚脱氧核苷酸特定的碱基序列有关。以上结果证实了，本发明CpG寡聚脱氧核苷酸应用于疫苗制备中可以明显增强疫苗免疫原性，减少免疫针次，降低抗原使用量，具有较好的疫苗佐剂效果。

技术研发人员：佘广彪,张雪茹,秦程苑,张艳玲,黄恩启,吴常伟,杨世龙
受保护的技术使用者：安徽智飞龙科马生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1