本发明属于甜味剂生产，具体涉及一种从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d的方法。
背景技术：
1、莱鲍迪苷d(简称rd)是甜菊糖组分中的一种，除了具有甜菊糖的低热量、有保健作用的优点外，其口感也较好，几乎无甜菊糖苷st、ra等后苦味的不良口感，同时甜度也很高，糖度是蔗糖甜度的200-300倍。
2、目前，国际上比较重点关注甜菊糖中各种单一组分的提纯方法的研究。因为单一组分的口感比较单一，可以直接添加在食品或者药品当中，并且以单组份纯品作为研究对象可以进行一系列的性质等方面的研究。
3、rd为甜菊糖混合物中其中一种单组份，因其在甜菊糖中含量很少，目前主流的方法是利用甜叶菊直接提取，此方法得到的rd纯度不够，仍含有不少stv、ra等影响甜味。如果能够利用生物酶法催化甜菊糖反应液为原料，提纯单一组分rd，将为实现高纯rd产品的生产提供可靠的方法。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d的方法，从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d，一次结晶可将莱鲍迪苷d的含量提高至91％以上，为实现高纯莱鲍迪苷d的生产提供了可靠的方法，解决了现有技术中提纯莱鲍迪苷d纯度低(1-5％)的问题。
2、为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：
3、一种从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d的方法，包括如下步骤：
4、(1)预处理：生物酶法催化甜菊糖反应液加热处理后，依次经固液分离、树脂吸附、洗脱液浓缩，得到浓缩液；
5、(2)溶解：向步骤(1)得到的浓缩液中加入有机溶剂混合，溶解，过滤除杂，得到溶液；
6、(3)结晶：向步骤(2)得到的溶液中先后加入晶种和反溶剂，搅拌结晶、过滤洗涤，干燥，得到莱鲍迪苷d。
7、本发明步骤(1)中所述热处理为80-95℃下保持60min以上；优选为60-120min。
8、本发明步骤(1)中所述固液分离为本领域常规技术手段，包括但不限于离心、过滤或絮凝。
9、本发明步骤(1)中所述树脂为具有高二萜化合物选择性的树脂产品，包括但不限于d系列、lx、xda系列或hb-8，采用的洗脱液为体积分数20-70％的乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液的体积分数为40-70％。
10、本发明步骤(1)中所述浓缩为控制洗脱液中甜菊糖的质量分数不低于80％，可采用本领域常规的浓缩方式实现，包括但不限于真空浓缩、滤膜浓缩。具体操作过程中，所述浓缩为浓缩至原生物酶法催化甜菊糖反应液的4-12％即可。
11、本发明步骤(2)中所述有机溶剂为体积分数95-99.9％的甲醇水溶液；所述浓缩液和有机溶剂的体积比为1：1-2；优选地，所述有机溶剂为体积分数99.9％的甲醇水溶液；所述浓缩液和有机溶剂的体积比1：1.2-1.6。
12、本发明步骤(3)中所述晶种为莱鲍迪苷d，所述晶种的加入量为溶液质量分数的0.1‰-1.7‰；优选地，所述晶种的加入量为溶液质量分数的0.48‰-1.6‰。
13、本发明步骤(3)中所述反溶剂为乙醚和/或氯仿；所述反溶剂的加入量为溶液体积的1-5％；优选地，所述反溶剂的加入量为溶液体积的3.4-4.8％。
14、本发明步骤(3)中反溶剂的加入时间对莱鲍迪苷d的纯度影响至关重要，优选地，所述反溶剂的加入时间为：晶种加入后的第5-10min。
15、本发明步骤(3)中所述搅拌结晶为：温度20-50℃，转速50-200rpm/min，结晶2-8h；优选地，所述转速为100rpm/min，结晶时间为4-8h。
16、本发明步骤(3)中所述洗涤为采用体积分数95-99％的乙醇水溶液进行洗涤。
17、本发明步骤(3)中所述干燥为：真空干燥，具体为：70℃下真空干燥过夜。
18、本发明的一种从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d的方法，还包括至少一次的重结晶步骤，具体为：将步骤(3)得到的莱鲍迪苷d进行二次溶解，得到二次溶解液；向二次溶解液中加入晶种，搅拌结晶，过滤、干燥，得到高纯莱鲍迪苷d。
19、优选地，所述晶种为莱鲍迪苷d，所述晶种的加入量为溶液质量分数的0.1‰-1.7‰；优选地，所述晶种的加入量为溶液质量分数的0.48‰-1.6‰。
20、优选地，所述搅拌结晶为：温度20-50℃，转速50-200rpm/min，结晶2-8h；进一步优选地，所述转速为100rpm/min，结晶时间为4-8h；
21、优选地，所述干燥为：真空干燥，具体为：70℃下真空干燥过夜。
22、本发明的有益成果：
23、(1)本发明从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d，一次结晶可将莱鲍迪苷d的含量提高至91％以上，为实现高纯莱鲍迪苷d的生产提供了可可的方法。
24、(2)本发明的工艺简单，加入反溶剂致使溶解剂用量低，结晶时间明显缩短能耗较低；
25、(3)本发明所用溶剂可实现浓缩回收循环利用，实现了较低的环境污染与较高的经济效益。
26、(4)本发明经重结晶后，可得的含量为95-98％的高纯度莱鲍迪苷d。
1.一种从生物酶法催化甜菊糖反应液中提取莱鲍迪苷d的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述热处理为80-95℃下保持60min以上；所述树脂为具有高二萜化合物选择性的树脂产品，采用的洗脱液为体积分数20-70％的乙醇水溶液；所述浓缩为控制洗脱液中甜菊糖的质量分数不低于80％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述有机溶剂为体积分数95-99.9％的甲醇水溶液；所述浓缩液和有机溶剂的体积比为1：1-2。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述晶种为莱鲍迪苷d，所述晶种的加入量为溶液质量分数的0.1‰-1.7‰。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述反溶剂为乙醚和/或氯仿，所述反溶剂的加入量为溶液体积的1-5％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述反溶剂的加入时间为：晶种加入后的第5-10min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述搅拌结晶为：温度20-50℃，转速50-200rpm/min，结晶2-8h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述洗涤为采用体积分数95-99％的乙醇水溶液进行洗涤。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，还包括至少一次的重结晶步骤，具体为：将步骤(3)得到的莱鲍迪苷d进行二次溶解，得到二次溶解液；向二次溶解液中加入晶种，搅拌结晶，过滤、干燥，得到高纯莱鲍迪苷d。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述晶种为莱鲍迪苷d，所述晶种的加入量为二次溶解液质量分数的0.1‰-1‰，所述搅拌结晶为：温度20-50℃，转速50-200rpm/min，结晶2-8h。