一种类人胶原蛋白制备方法及其在化妆品中的应用与流程

本发明涉及胶原蛋白，更具体地，涉及一种类人胶原蛋白制备方法及其在化妆品中的应用。

背景技术：

1、胶原蛋白最主要的基本结构单位是原胶原，是由三条相互缠绕的a链的多肽链组成的三重螺旋结构，长度大约为1000个氨基酸残基，该结构是所有胶原蛋白的典型特征结构，胶原蛋白含有包括人体生长所必须的七种氨基酸在内的二十多种氨基酸。胶原蛋白因其具有独特的结构特征，良好的物理性能、生物降解性和生物相容性，在医药、食品、化妆品、组织工程和材料工程等领域有广泛应用。

2、目前胶原蛋白主要从动物组织中提取和利用基因工程改造的微生物菌株表达两种途径获得。前者由于天然胶原蛋白由多种不同分子量的胶原蛋白组成的混合物，结构多样，不能溶于水，可加工性较弱，限制了许多开发用途。天然胶原蛋白主要来源于动物源的胶原蛋白，对动物源疾病或者人传染病有交叉传染的危险。异体来源的胶原蛋白会产生异体排斥反应，使胶原蛋白在人体中应用存在困难。原料短缺，随着人们对健康和美容的要求越来越高，动物来源的胶原蛋白远远不能满足人们日常需要。后者通常是采用大肠杆菌作为表达宿主进行异源表达，但是其表达量会受到限制，无论是胞内表达还是分泌到胞外表达，其蛋白组分复杂，纯化过程较久。因此如何保证纯化过程的快速，减少纯化步骤和总时长，对于维持胶原蛋白结构的完整性很重要，同时更容易满足工业需求。

技术实现思路

1、针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种类人胶原蛋白制备方法及其在化妆品中的应用。所述类人胶原蛋白具备润滑角质层，修护砖墙结构，促进上皮细胞及成纤维细胞增长，增加皮肤紧密度，令皮肤紧致，赋予弹性嫩滑，保护肌肤涵水屏障，改善肌肤微环境，滋润清透不粘腻。呵护肌肤屏障，抗微生物及酶，调节细胞生长微环境，抵御外界刺激。

2、具体而言，本发明提供了一种类人胶原蛋白，其特征在于，类人胶原蛋白单体的氨基酸序列如seq id no:1所示。

3、优选地，所述编码所述类人胶原蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示。

4、进一步地，本发明还提供了一种包含所述的类人胶原蛋白编码基因的重组表达载体。

5、进一步地，本发明还提供了一种包含所述的类人胶原蛋白编码基因的重组菌株。

6、进一步地，本发明还提供了一种制备所述类人胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤，

7、1)构建包括编码所述类人胶原蛋白的基因的重组表达载体；

8、2)将获得的重组表达载体导入宿主细胞，并诱导培养；

9、3)分离纯化获得重组人源胶原蛋白。

10、优选地，步骤1)中编码所述类人胶原蛋白的基因序列如seq id no.2所示。

11、进一步优选地，步骤1)合成的编码所述类人胶原蛋白的基因通过酶切连接方式克隆至质粒puc57，构建成重组质粒形式，并通过酶切电泳鉴定；

12、进一步优选地，步骤2)是通过电击转化方式导入宿主细胞。

13、进一步优选地，步骤2)中的宿主细胞包括酿酒酵母、毕赤酵母等。

14、进一步优选地，步骤2)中还包括通过菌落pcr筛选重组酿酒酵母，并结合测序分析进行鉴定的步骤。

15、进一步优选地，步骤2)中的诱导培养为摇瓶发酵培养，发酵培养条件为：挑选单菌落接种于诱导发酵培养基进行摇瓶培养，培养条件为30℃、200rpm震荡72h。

16、进一步优选地，所述诱导发酵培养基为蛋白胨20g/l，酵母粉10g/l，甘油20g/l，k2hpo43 g/l,kh2po412g/l、甲醇10g/l，生物素5×10-4g/l，采用去离子水配制而成。

17、进一步优选地，步骤3)包括收集发酵液，经硫酸铵盐析沉淀提取类人胶原蛋白，再利用透析袋进行过滤透析去除残留硫酸铵盐，纯化得到类人胶原蛋白，最后经冷冻干燥机冻干，备用。

18、进一步地，本发明还提供了上述类人胶原蛋白在制备皮肤抗皱、紧致、修复、保湿产品中的用途。

19、优选地，所述产品包括化妆品。

20、本发明的优点如下：本发明首次提供了一种类人胶原蛋白，其能有效促进成纤维细胞增殖活性，具备润滑角质层，修护砖墙结构，促进上皮细胞及成纤维细胞增长。本发明的类人胶原蛋白能够很好的促进成纤维细胞生成elastin，增加皮肤紧密度，令皮肤紧致，赋予弹性嫩滑。本发明的类人胶原蛋白具有保护肌肤涵水屏障，改善肌肤微环境，滋润清透不粘腻。呵护肌肤屏障，抗微生物及酶，调节细胞生长微环境，抵御外界刺激。

技术特征：

1.一种类人胶原蛋白，其特征在于，类人胶原蛋白单体的氨基酸序列如seq id no:1所示。

2.如权利要求1所述的类人胶原蛋白，其特征在于，编码所述类人胶原蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.一种包含权利要求1或2任一项所述的类人胶原蛋白编码基因的重组表达载体。

4.一种包含权利要求1或2任一项所述的类人胶原蛋白编码基因的重组菌株。

5.一种制备权利要求1或2任一项所述类人胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤，

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)中编码所述类人胶原蛋白的基因序列如seq id no.2所示。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)合成的编码所述类人胶原蛋白的基因通过酶切连接方式克隆至质粒puc57，构建成重组质粒形式，并通过酶切电泳鉴定。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中的诱导培养为摇瓶发酵培养，发酵培养条件为：挑选单菌落接种于诱导发酵培养基进行摇瓶培养，培养条件为30℃、200rpm震荡72h。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述诱导发酵培养基为蛋白胨20g/l，酵母粉10g/l，甘油20g/l，k2hpo43 g/l,kh2po412g/l、甲醇10g/l，生物素5×10-4g/l，采用去离子水配制而成。

10.权利要求1或2任一项类人胶原蛋白在制备皮肤抗皱、紧致、修复、保湿产品中的用途。

技术总结
本发明提供了一种类人胶原蛋白制备方法及其在化妆品中的应用。本发明首次提供了一种类人胶原蛋白，其能有效促进成纤维细胞增殖活性，具备润滑角质层，修护砖墙结构，促进上皮细胞及成纤维细胞增长。本发明的类人胶原蛋白能够很好的促进成纤维细胞生成Elastin，增加皮肤紧密度，令皮肤紧致，赋予弹性嫩滑。本发明的类人胶原蛋白具有保护肌肤涵水屏障，改善肌肤微环境，滋润清透不粘腻。呵护肌肤屏障，抗微生物及酶，调节细胞生长微环境，抵御外界刺激。

技术研发人员：余恩浩,余恩典,李晓波,余梓涵
受保护的技术使用者：广州高泰生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5