一种抗原特异性T细胞的制备方法及其在免疫治疗中的应用与流程

本发明涉及制备抗原特异性t细胞的方法，尤其是通过dc细胞的抗原交叉呈递。本发明还涉及该方法或t细胞在免疫治疗中的应用。

背景技术：

1、树突状细胞（dcs）是专职抗原呈递细胞（apcs），在适应性免疫反应的启动和调节中发挥核心作用。除了呈递内源性的抗原外，dc细胞还能够通过交叉呈递的方式递呈外源性抗原给cd8+t细胞, 这些外源抗原通常来自肿瘤细胞或者病毒感染的细胞。抗原交叉呈递是一个复杂且精密调节的过程，步骤包括dc细胞将外源性抗原摄取并加工成抗原肽，抗原肽在内质网内与mhc-i 分子结合形成抗原肽/mhc复合物后转移至dc细胞表面，再由dc细胞呈递给cd8+t细胞。抗原交叉呈递已经被证明在诱导并促进抗原特异性cd8+t细胞的分化和扩增的免疫反应中发挥了关键作用，基于该原理的技术设计已经被用于开发新的癌症治疗和疫苗，其中包括使用dc细胞作为癌症疫苗载体，并结合佐剂和细胞因子来增强交叉呈递效率和特异性。此外，抗原交叉呈递技术还被用于研究自身免疫疾病、感染和免疫调节等领域。

2、dc细胞摄取抗原的方式有以下几种。(1) 抗原肽段：通过将dc细胞与合成肽段孵育，可以直接将来自抗原的短肽段加载到dc细胞表面的mhc-i 分子上。(2) 肿瘤裂解物：dc细胞可与肿瘤细胞裂解物孵育以摄取抗原。这种方法模拟了抗原呈递的自然过程，并可能为抗原交叉呈递提供更多样化的抗原。(3) mrna：可使用电转或基于脂质的转染试剂将编码肿瘤抗原的mrna转染到dc细胞中。这种方法具有表达多种抗原的优点，可以用于制备个性化定制的dc细胞。(4) 病毒载体：重组病毒可用于将抗原基因传递到dc细胞中，从而实现抗原表达和呈递。(5) 纳米颗粒：可以使用纳米颗粒，如脂质体、树状聚合物或聚合物纳米颗粒，将抗原传递给dc细胞。在实践中，抗原摄取方法的选择可能取决于多个因素，例如抗原的来源以及在临床应用时的可行性。例如，基于mrna的方法可能更适合为患者制备个性化的dc疫苗。从患者的肿瘤组织中获取肿瘤裂解物作为抗原来源的方法，不必进行抗原纯化，更适用于快速制备dc细胞癌症疫苗。另外，肿瘤裂解物中包含众多肿瘤相关抗原，新生抗原，这种裂解物直接加入dc细胞培养体系，由dc细胞来摄取，加工并决定肿瘤抗原的免疫原性，从而省去了繁杂的抗原筛选过程。最近美国药企northwest报导的已经完成三期临床的治疗脑胶质瘤的dc细胞疫苗，即采用了肿瘤裂解物的抗原交叉递呈方式。

技术实现思路

1、在一方面，本文提供了制备抗原特异性t细胞的方法，包括如下步骤：

2、1) 制备高表达trail的dc细胞；

3、2) 让所述dc细胞与含有异源抗原并表达trail死亡受体的细胞接触；以及

4、3) 让所述dc细胞与hla i类分子匹配的t细胞接触，以获得对所述异源抗原具有特异性的t细胞。

5、在一些实施方案中，步骤3)包括让所述dc细胞与pmbc细胞接触，并在白介素2存在下继续培养所述pmbc细胞。

6、在一些实施方案中，所述trail死亡受体为dr5。

7、在一些实施方案中，所述异源抗原为肿瘤抗原或病毒抗原。

8、在一些实施方案中，所述hla i类分子为hla-a。

9、在一些实施方案中，所述hla i类分子为hla-a0201。

10、在一些实施方案中，所述含有异源抗原并表达trail死亡受体的细胞为肿瘤细胞或非肿瘤细胞。

11、在一些实施方案中，所述含有异源抗原并表达trail死亡受体的细胞为经改造而表达所述异源抗原。

12、在一些实施方案中，所述非肿瘤细胞为293细胞。

13、另一方面，本文提供了经改造而表达trail死亡受体和异源抗原的非肿瘤细胞。

14、在一些实施方案中，所述非肿瘤细胞为293细胞。

15、在一些实施方案中，所述trail死亡受体为dr5。

16、在一些实施方案中，所述异源抗原为肿瘤抗原或病毒抗原。

17、另一方面，本文提供了所述非肿瘤细胞在制备抗原特异性t细胞中的用途。

18、另一方面，本文提供了上述方法制备的抗原特异性t细胞在制备治疗疾病的药物中的用途，其中所述疾病与表达所述抗原相关。

19、在一些实施方案中，所述抗原为肿瘤抗原或病毒抗原，所述疾病为肿瘤或病毒性疾病。

20、在一些实施方案中，所述抗原为cmv pp65。

21、本发明通过将trail基因稳定导入dc细胞，使其高表达trail分子。这类dc细胞，通过作用于肿瘤细胞表面的死亡受体或经改造而表达死亡受体和异源抗原的非肿瘤细胞，可选择性杀伤肿瘤细胞或该非肿瘤细胞，摄取癌抗原或异源抗原，通过抗原交叉递呈方式高效地诱导抗原特异性cd8+t细胞介导的免疫反应。

技术特征：

1.制备抗原特异性t细胞的方法，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其中步骤3)包括让所述dc细胞与pmbc细胞接触，并在白介素2存在下继续培养所述pmbc细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述trail死亡受体为dr5。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述异源抗原为肿瘤抗原或病毒抗原。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述hla i类分子为hla-a。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述hla i类分子为hla-a0201。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述含有异源抗原并表达trail死亡受体的细胞为肿瘤细胞或非肿瘤细胞。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述含有异源抗原并表达trail死亡受体的细胞为经改造而表达所述异源抗原。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述非肿瘤细胞为293细胞。

10.经改造而表达trail死亡受体和异源抗原的非肿瘤细胞。

11.如权利要求10所述的非肿瘤细胞，其为293细胞。

12.如权利要求10或11所述的非肿瘤细胞，其中所述trail死亡受体为dr5。

13.如权利要求10或11所述的非肿瘤细胞，其中所述异源抗原为肿瘤抗原或病毒抗原。

14.权利要求13所述的非肿瘤细胞在制备抗原特异性t细胞中的用途。

15.权利要求1-8任一项所述的方法制备的抗原特异性t细胞在制备治疗疾病的药物中的用途，其中所述疾病与表达所述抗原相关。

16.如权利要求15所述的用途，其中所述抗原为肿瘤抗原或病毒抗原，所述疾病为肿瘤或病毒性疾病。

17.如权利要求15或16所述的用途，其中所述抗原为cmv pp65。

技术总结
本文提供了制备抗原特异性T细胞的方法，包括1)制备高表达TRAIL的DC细胞；2)让所述DC细胞与含有异源抗原并表达TRAIL死亡受体的细胞接触；以及3)让所述DC细胞与HLA I类分子匹配的T细胞接触，以获得对所述异源抗原具有特异性的T细胞。本文还提供了该方法或T细胞在免疫治疗中的应用。

技术研发人员：吕春萍,刘婕,王玉娇,于耀程
受保护的技术使用者：北京翊博生物集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15