一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1及其应用

本发明涉及微生物，具体涉及一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1及其应用。

背景技术：

1、我国是世界上农药和化肥的使用大国。一方面，化肥的大量施用造成土壤有机质缺乏，土壤微生物和小动物等有益生物减少，影响了土壤的生物活性，降低了土壤肥力；而一部分未被作物吸收利用和未被土壤吸收固定的化肥，随农田排水流入周边水体，造成氮素和磷素的富集，产生富营养化。而且我国氮肥的当季利用率低，仅为30％～50％，损失的氮素中有相当部分以氨气、氮氧化物气体进入大气，对大气环境造成影响，特别是以一氧化二氮(n2o)的形式排放到大气中。n2o是仅次于二氧化碳和甲烷的第三大温室气体，农业生产带来的n2o排放量约占人类活动总排放量的80％。我国农业生产中氮肥使用量的增加，导致温室气体n2o排放呈现进一步扩大的趋势。因此，减少农业生产中化肥使用可有效减排，从而减少农业生产对气候变化的影响。另一方面，化学农药的大量使用导致大量农药残留植物根际，农作物通过根系吸收土壤中的残留农药或通过农作物表皮吸收粘着在植物叶面上的农药进入农作物内部，造成农作物和食品的农药污染；同时，长期使用农药造成了病原微生物的抗药性增加，使得不断增加用药次数、浓度和用量等，加剧了对生态环境的污染和生态系统的破坏。

2、生防促生微生物在促进植物营养吸收和维持植物健康中发挥着关键作用，对作物的生长和降低病害具有重要的科学和农艺价值，具有环保无污染的特点。近年来，生防促生菌应用到农业生产中来促进植物生长和控制植物病虫害的例子越来越多，已成为减少使用化肥农药的替代产品。目前，在国家化肥农药双减和新型绿色增值肥料产业化政策的实施下，微生物菌肥/农药的研究与开发成为今后农业可持续发展的重点，开发相应的生防促生微生物菌剂能够迎合绿色环保可持续的生态农业理念，是一种绿色、可行、有效的手段和途径。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1及其应用，该菌株不仅对多种土传病害病原菌具有较好的拮抗效果，而且还能在植株根际和叶面有效定殖；另外，该菌株对水稻可具有明显的促生效果，对水稻纹枯病可具有一定的防控效果，满足农业使用需求。

2、为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

3、一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1，所述解淀粉芽孢杆菌ys1已于2023年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m 2023585，保藏地址为中国武汉·武汉大学，所述解淀粉芽孢杆菌ys1的分类命名为bacillusammyloliquefaciens ys1。

4、本发明的解淀粉芽孢杆菌ys1是从广西梧州野生稻叶片中分离纯化得到，分离鉴定方法如下：将野生稻植株从土壤中轻轻拔出，装于塑料盆内，立即带回实验室。野生稻植株用自来水洗净后，将叶片剪成长3cm、宽1cm放入灭菌的培养皿中，依次经过70％乙醇消毒5min、2％ naclo消毒5min、无菌水洗5次后，用无菌镊子将消毒叶片放入lb培养基(蛋白胨10g、酵母粉5g、nacl 10g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，ph 7.0)中，轻轻按压使水稻叶片紧贴培养基。同时，最后一次洗涤的无菌水涂布于lb平板以检查植株是否消毒彻底。待培养基中长出细菌后，用接种环挑取叶片周围菌苔，用四分划线法对菌株进行分离纯化；如此重复，直至得到纯的单菌落。

5、生防芽孢杆菌ys1在lb培养基(蛋白胨10g、酵母粉5g、nacl10g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，ph 7.0)上培养24h后的菌落特征为乳白色，边缘不规则，表面干燥有褶皱，革兰氏染色阳性，产芽孢(见图1)。

6、ys1的生理生化特征：蔗糖利用，淀粉水解，硝酸盐还原，接触酶实验，明胶液化，柠檬酸盐、vp实验和蛋白酶实验为阳性；酪素水解，mr实验，脲酶实验和酯酶实验为阴性；对7种抗生素均表现出敏感性(表1)。

7、表1菌株ys1的抗生素抗性特性

8、

9、

10、注：“s”表示敏感，“r”表示不敏感。

11、将菌株接种于lb液体培养基中，30℃150rpm振荡培养16h，取1.5ml菌液于eppendorf离心管中，5000rpm离心5min收集菌体，采用细菌dna提取试剂盒提取细菌总dna，pcr扩增细菌16s rrna基因和持家基因(gyra)，扩增产物经测序后与genbank数据库中已知16s rrna基因序列进行比对分析，与bacillus amyloliquefaciens mpa1034的16s rrna基因序列相似性达到99.93％；ys1的16s rrna基因序列登录号为oq422486，gyra基因序列登录号为or044748，将其鉴定并分类命名为(bacillus amyloliquefaciens)ys1。

12、为实现上述发明目的，本发明还提供如下技术方案：

13、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在植物促生中的应用。

14、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在抑菌中的应用。

15、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在制备菌剂中的应用。

16、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在制备生物肥料中的应用。

17、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在防控植物病害中的应用。

18、优选的，所述植物病害包括水稻纹枯病、辣椒炭疽病、香蕉枯萎病和番茄青枯病。

19、所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在水稻促生和防治水稻纹枯病中的应用。

20、优选的，所述解淀粉芽孢杆菌ys1采用灌根方式来促进水稻生长。

21、优选的，所述解淀粉芽孢杆菌ys1采用喷施水稻叶面方式来防治水稻纹枯病。

22、与现有技术相比，本发明有益效果如下：

23、本发明的解淀粉芽孢杆菌ys1不仅对多种土传病害病原菌具有较好的拮抗效果，而且还能在植株根际和叶面有效定殖；另外，该菌株通过根际浇灌方式对水稻具有明显的促生效果，通过喷施叶面方式对水稻纹枯病具有一定的防控效果，其防控效果达61.1％。利用本发明所提供的解淀粉芽孢杆菌菌株ys1可以代替部分农药及化肥的施用，有效地保护农作物的生产以及减少农田农药和化肥的污染。

技术特征：

1.一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌ys1已于2023年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m2023585，保藏地址为中国武汉·武汉大学。

2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在植物促生中的应用。

3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在抑菌中的应用。

4.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在制备菌剂中的应用。

5.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在制备生物肥料中的应用。

6.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在防控植物病害中的应用。

7.根据权利要求6所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在防控植物病害中的应用，其特征在于，所述植物病害包括水稻纹枯病、辣椒炭疽病、香蕉枯萎病和番茄青枯病。

8.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在水稻促生和防治水稻纹枯病中的应用。

9.根据权利要求8所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在水稻促生和防治水稻纹枯病中的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌ys1采用灌根方式来促进水稻生长。

10.根据权利要求8所述的解淀粉芽孢杆菌ys1在水稻促生和防治水稻纹枯病中的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌ys1采用喷施水稻叶面方式来防治水稻纹枯病。

技术总结
本发明公开了一株具有抗病促生作用的解淀粉芽孢杆菌ys1及其应用，所述解淀粉芽孢杆菌ys1已于2023年4月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M 2023585，保藏地址为中国武汉·武汉大学。本发明的解淀粉芽孢杆菌ys1不仅对多种土传病害病原菌具有较好的拮抗效果，而且还能在植株根际和叶面有效定殖；另外，该菌株通过根际浇灌方式对水稻具有明显的促生效果，通过喷施叶面方式对水稻纹枯病具有一定的防控效果，其防控效果达61.1％。利用本发明所提供的解淀粉芽孢杆菌菌株ys1可以代替部分农药及化肥的施用，有效地保护农作物的生产以及减少农田农药和化肥的污染。

技术研发人员：袁涛,许巧玲,黄柱坚,刘向铜,许丹,李芸,方睿,李皓伦
受保护的技术使用者：东华理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15