一种二烯吡咯草酸菌素及其制备方法和应用

本发明属于化合物制备及生化医药，具体涉及一种二烯吡咯草酸菌素及其制备方法和应用。

背景技术：

1、炎症是危害人类健康的重大疾病。近几十年来，国内外研究者都在致力于开发高效、低毒的炎症治疗药物。青霉菌是子囊菌的一种，其菌丝体通常为多核，有隔，由无色的菌丝组成的高度分枝的网络。几乎所有的青霉都具有其潜在的药用价值，这可追溯到1928年亚历山大·弗莱明偶然发现青霉素。微生物因其不受生长季节限制且可人工大规模培养的特点，相较于其他生物资源而言不致引起生态破坏，易于解决药源问题，因此在后续开发研究方面具有独特的优势。

2、生物碱是存在于自然界中的一类含氮的碱性有机化合物。由不同的氨基酸或其直接衍生物合成而来，是次级代谢物之一，是中草药中重要的有效成分之一，据文献报道，生物碱类化合物具有抗炎、抗肿瘤以及抗菌等多种生物活性但是大多生物碱类物质在发挥药物活性的同时，对生物机体有毒性或强烈的生理作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种二烯吡咯草酸菌素及其制备方法和应用，所述二烯吡咯草酸菌素为一种新的生物碱类化合物，具有较好的抗炎活性，且无细胞毒性。

2、本发明提供了一种二烯吡咯草酸菌素，结构如式ⅰ所示：

3、

4、本发明还提供了上述技术方案所述二烯吡咯草酸菌素的制备方法，包括：将青霉属内生真菌(penicillium oxalicum)mwtg-03的发酵物的极性有机溶剂提取物依次进行硅胶柱色谱层析、凝胶柱色谱分离和高效液相色谱分离，得到所述二烯吡咯草酸菌素；

5、所述硅胶柱色谱层析的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇体系；所述二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比为100：0～3：1；

6、所述凝胶柱色谱分离的洗脱剂为甲醇；

7、所述高效液相色谱分离的流动相为甲醇-水体系；

8、所述青霉属内生真菌mwtg-03的保藏编号为cctcc m 20231220。

9、优选的，所述硅胶柱色谱层析包括：

10、依次采用体积比100：0、100：1、50：1、30：1、10：1和3：1的二氯甲烷-甲醇体系进行洗脱，收集体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇溶液洗脱段，得到硅胶柱色谱层析液。

11、优选的，所述甲醇-水体系中甲醇和水的体积比为6～9：4～5。

12、优选的，所述高效液相色谱分离包括制备型高效液相色谱分离；所述高效液相色谱分离的色谱柱为c18色谱柱。

13、优选的，所述极性有机溶剂提取物的制备包括如下步骤：

14、将活化的青霉属内生真菌mwtg-03接种至发酵培养基中进行发酵培养，得到所述青霉属内生真菌mwtg-03的发酵物；

15、将所述青霉属内生真菌mwtg-03的发酵物与极性有机溶剂混合后进行超声提取，得到极性有机溶剂提取物。

16、优选的，所述发酵培养基为灭菌的马铃薯；所述发酵培养的温度为18～28℃，时间为28～32d。

17、优选的，所述青霉属内生真菌mwtg-03发酵物的质量与极性有机溶剂的体积比为(30～80)g：(50～150)ml；所述超声提取的频率为40～53khz，时间为30～60min。

18、本发明还提供了上述技术方案所述二烯吡咯草酸菌素或上述技术方案所述制备方法制备得到的二烯吡咯草酸菌素在制备抗炎药物中的应用。

19、本发明还提供了一种青霉属内生真菌(penicillium oxalicum)mwtg-03，所述青霉属内生真菌mwtg-03的保藏编号为cctcc m 20231220。

20、有益效果：

21、本发明提供了一种二烯吡咯草酸菌素，结构如式ⅰ所示：

22、

23、

24、本发明提供的二烯吡咯草酸菌素是一种新的生物碱类化合物，具有较强的抗炎活性，重要的是，与常规生物碱类化合物相比，其不具有细胞毒性，可以用于制备预防或治疗炎症的药物，为开发预防或治疗炎症提供了新化合物或小分子先导化合物，也为医用工业提供有应用价值的新药源分子。

25、本发明还提供了所述二烯吡咯草酸菌素的制备方法，包括：将青霉属内生真菌mwtg-03(penicillium oxalicum)的发酵物的乙酸乙酯提取物依次进行硅胶柱色谱层析、凝胶柱色谱分离和高效液相色谱分离，得到所述二烯吡咯草酸菌素；所述硅胶柱色谱层析的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇体系；所述二氯甲烷-甲醇体系中二氯甲烷和甲醇的体积比为100：0～3：1；所述凝胶柱色谱分离的洗脱剂为甲醇；所述高效液相色谱分离的洗脱剂为甲醇-水体系；所述青霉属内生真菌mwtg-03的保藏编号为cctcc m 20231220。本发明所述二烯吡咯草酸菌素为青霉属内生真菌mwtg-03的代谢产物，可以通过微生物发酵制备得到，制备方法具有培养条件温和、培养基配制简单易行、发酵时间短、易于大规模生产等优势，不仅符合现代环保和低碳经济的需求，还能够利用其开发成预防或治疗炎症药物解决了原料问题。

26、生物保藏信息：

27、青霉属内生真菌mwtg-03(penicillium oxalicum)，已于2023年07月06日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏编号为cctcc m 20231220。

技术特征：

1.一种二烯吡咯草酸菌素，结构如式ⅰ所示：

2.权利要求1所述二烯吡咯草酸菌素的制备方法，其特征在于，包括：将青霉属内生真菌(penicillium oxalicum)mwtg-03的发酵物的极性有机溶剂提取物依次进行硅胶柱色谱层析、凝胶柱色谱分离和高效液相色谱分离，得到所述二烯吡咯草酸菌素；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱色谱层析包括：

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述甲醇-水体系中甲醇和水的体积比为6～9：4～5。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述高效液相色谱分离包括制备型高效液相色谱分离；所述高效液相色谱分离的色谱柱包括c18色谱柱。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述极性有机溶剂提取物的制备包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基为灭菌的马铃薯；所述发酵培养的温度为18～28℃，时间为28～32d。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述青霉属内生真菌mwtg-03发酵物的质量与极性有机溶剂的体积比为(30～80)g：(50～150)ml；所述超声提取的频率为40～53khz，时间为30～60min。

9.权利要求1所述二烯吡咯草酸菌素或权利要求2～8任一项所述制备方法制备得到的二烯吡咯草酸菌素在制备抗炎药物中的应用。

10.一种青霉属内生真菌(penicillium oxalicum)mwtg-03，所述青霉属内生真菌mwtg-03的保藏编号为cctcc m 20231220。

技术总结
本发明属于化合物制备及生化医药技术领域，具体涉及一种二烯吡咯草酸菌素及其制备方法和应用。本发明提供的二烯吡咯草酸菌素是一种新的生物碱类化合物，具有较强的抗炎活性，重要的是，与常规生物碱类化合物相比，其不具有细胞毒性且易于合成，可以用于制备预防或治疗炎症的药物，为开发预防或治疗炎症提供了新化合物或小分子先导化合物，也为医用工业提供有应用价值的新药源分子。

技术研发人员：丁中涛,蔡乐,王诚曜,杨亚滨
受保护的技术使用者：云南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25