抗人MSH6蛋白的兔单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及抗体制备，特别涉及抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、muts同源物6(muts homolog 6，msh6)基因是一种错配修复(mismatch repair，mmr)基因muts家族的成员，位于2号染色体上，跨越24kb基因组序列，由10个外显子组成，编码1360个氨基酸蛋白，其编码的msh6蛋白主要参与识别、修复碱基取代和单碱基插入/缺失错配。msh6蛋白在大部分微卫星高度不稳定(msi-h)患者中是缺陷的；此外，msh6蛋白在某些恶性肿瘤中也是缺陷的，如遗传性非息肉病性结直肠癌(hnpcc，又称lynch综合征)和子宫内膜癌。hnpcc是一种常染色体显性遗传疾病，与癌症易感性显著增加有关，其特征是家族易患早发性结肠直肠癌(crc)和胃肠道、泌尿系统和女性生殖道的结肠外癌。hnpcc中的癌症起源于称为腺瘤的良性肿瘤性息肉。据报道，msh6突变与非典型hnpcc相关，特别是与子宫内膜癌或非典型子宫内膜增生(推测为子宫内膜癌的前体)的发展相关。在不符合hnpcc标准的家族性结肠直肠癌(疑似或不完全hnpcc)中也发现了msh6缺陷。msh6缺陷也是子宫内膜癌(endmc)易感性的一个原因。临床上，msh6通常与mlh1、msh2和pms2组合检测，用于hnpcc的筛查。

2、临床上常用免疫印迹(wb)、免疫组织化学(ihc)等免疫学方法检测病理样本中msh6蛋白的表达情况，技术核心为特异性结合该蛋白的单克隆抗体，抗体性能的优劣直接决定着检测结果的可靠性和准确性。然而，市面上高特异性的抗msh6蛋白的抗体较少，能够应用于免疫学检测的则更少，因此，开发出一种结合特异性高、具备良好msh6蛋白结合能力的单克隆抗体对实现msh6蛋白表达水平的免疫学检测具有重要的意义和广泛的市场前景。

技术实现思路

1、针对现有技术中抗人msh6蛋白抗体难以用于免疫学检测等问题，本发明提供了抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，并提供了该兔单克隆抗体在制备人msh6蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用，该抗体用于免疫检测时具有高准确性、高灵敏度、高特异性以及优良的抗干扰能力等优势。

2、为实现上述目的，本发明具体通过以下技术方案实现：

3、本发明第一方面提供了一种抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区，其中，轻链互补决定区1、轻链互补决定区2和轻链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq id no.3、seq idno.4、seq id no.5所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq id no.8、seq id no.9和seq id no.10所示。

4、进一步地，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

5、进一步地，还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区和所述轻链可变区构成轻链，所述重链恒定区和所述重链可变区构成重链；所述轻链的氨基酸序列如seq idno.1所示，所述重链的氨基酸序列如seq id no.6所示，且所述重链为igg型。

6、进一步地，所述兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；所述抗体片段选自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一种。

7、进一步地，制备所述兔单克隆抗体的免疫原为血蓝蛋白偶联人msh6蛋白2-35aa氨基酸序列，其中，所述人msh6蛋白2-35aa氨基酸序列如seq id no.11所示。

8、本发明第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码如上所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体。

9、本发明第三方面提供了一种重组载体，所述重组载体包含如上所述的核酸分子。

10、本发明第四方面提供了如上所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体、如上所述的核酸分子、如上所述的重组载体在制备人msh6蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用。

11、进一步地，免疫检测方法为免疫印迹法或免疫组织化学法。

12、进一步地，免疫检测样本包括血清、细胞或组织样本，其中，所述细胞包括人胚肾细胞，所述组织包括人扁桃体、人阑尾、人胰腺和人结肠癌中的一种或多种。

13、本发明的优点及积极效果为：

14、本发明的抗体可以特异性识别细胞和组织表达的人msh6蛋白，与人msh6蛋白结合的亲和力好，适用于msh6蛋白的免疫检测领域，尤其是免疫组织化学检测，用于免疫检测时具有高准确性、高灵敏度、高特异性以及优良的抗干扰能力等优势。

技术特征：

1.一种抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区，其中，轻链互补决定区1、轻链互补决定区2和轻链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq idno.8、seq id no.9和seq id no.10所示。

2.根据权利要求1所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。

3.根据权利要求2所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述轻链恒定区和所述轻链可变区构成轻链，所述重链恒定区和所述重链可变区构成重链；所述轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述重链的氨基酸序列如seq id no.6所示，且所述重链为igg型。

4.根据权利要求1或2所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；所述抗体片段选自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，制备所述兔单克隆抗体的免疫原为血蓝蛋白偶联人msh6蛋白2-35aa氨基酸序列，其中，所述人msh6蛋白2-35aa氨基酸序列如seq id no.11所示。

6.一种核酸分子，其特征在于，编码如权利要求1-5任一项所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体。

7.一种重组载体，其特征在于，包含如权利要求6所述的核酸分子。

8.如权利要求1-5任一项所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体在制备人msh6蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用。

9.根据权利要求8所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体在制备人msh6蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，免疫检测方法为免疫印迹法或免疫组织化学法。

10.根据权利要求8所述的抗人msh6蛋白的兔单克隆抗体在制备人msh6蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，免疫检测样本包括血清、细胞或组织样本，其中，所述细胞包括人胚肾细胞，所述组织包括人扁桃体、人阑尾、人胰腺和人结肠癌中的一种或多种。

技术总结
本发明属于抗体制备技术领域，尤其涉及抗人MSH6蛋白的兔单克隆抗体及其应用。所述抗人MSH6蛋白的兔单克隆抗体的轻链互补决定区1、轻链互补决定区2和轻链互补决定区3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑5所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8‑10所示。本发明的抗体可以特异性识别细胞和组织表达的人MSH6蛋白，与人MSH6蛋白结合的亲和力好，适用于MSH6蛋白的免疫检测领域，尤其是免疫组织化学检测，用于免疫检测时具有高准确性、高灵敏度、高特异性以及优良的抗干扰能力等优势。

技术研发人员：张婷,盛飞,刘瑾林,徐思丹,程瑶,吴海
受保护的技术使用者：武汉爱博泰克生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1