沙门氏菌的冻干保护剂、冻干品的制备方法及应用

本申请涉及沙门氏菌的样品制备，具体涉及沙门氏菌的冻干保护剂、冻干品的制备方法及应用。

背景技术：

1、沙门氏菌是沙门氏菌病的病原体，属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义(见表)。不液化明胶，不分解尿素，不产生吲哚，不发酵乳糖和蔗糖，能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖，大多产酸产气，少数只产酸不产气。vp试验阴性，有赖氨酸脱羧酶。dna的g+c含量为50～53％。对热抵抗力不强，在60℃15分钟可被杀死。在水中存活2～3周。在5％的石炭酸中，5分钟死亡。本属菌按生化反应分为4个亚属。亚属ⅰ是生化反应典型的和最常见的沙门氏菌；亚属ⅱ和ⅳ是生化反应不典型的沙门氏菌；亚属ⅲ是亚利桑那沙门氏菌。

2、常见的沙门氏菌有伤寒沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌和仙台沙门氏菌。沙门氏菌具有复杂的抗原结构，一般沙门氏菌具有菌体(o)抗原、鞭毛(h)抗原和表面抗原(荚膜或包膜抗原)三种抗原。

3、为对该菌属进行研究，常常需要对其进行菌种保藏，例如低温保藏、甘油管保藏，然而这些保藏方法对菌株的活性难免有负面影响，并且菌株的活化也会成为菌株的使用负担。

技术实现思路

1、真空冷冻干燥技术，是一种最有效的保存生物样品稳定性的手段，技术相对成熟，能够对产品进行批量生产，效果稳定，且冻干产品保存方便、贮藏稳定性强、便于运输的特点，广泛应用在蛋白质、益生菌、疫苗等领域生产中。本申请发明人开发了一类能够在冻干过程中加入至沙门氏菌菌液中进行冻干保护的制剂，能够形成性能稳定的沙门氏菌的冻干品。这些冻干品不仅方便贮藏和运输，而且具有十分高的菌存率，提高了菌株活性的效率。为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：

2、(1)一种沙门氏菌的冻干保护剂，其选自麦芽糖、葡萄糖、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、酵母提取物、抗坏血酸钠中的至少两种。

3、(2)一种沙门氏菌的冻干品，其包括(1)所述冻干保护剂以及与所述冻干保护剂混合并进行冷冻干燥形成固态样品的沙门氏菌。

4、(3)一种沙门氏菌冻干品的制备方法，包括：

5、准备沙门氏菌菌液和如(1)所述的冻干保护剂，其中，所述冻干保护剂为水溶液；

6、将所述沙门氏菌菌液与所述冻干保护剂混合后，依次进行预冻、第一温度保持、升温和第二温度保持。

7、(4)(1)所述冻干保护剂在制备沙门氏菌冻干品中的应用。

技术特征：

1.一种沙门氏菌的冻干保护剂，其选自麦芽糖、葡萄糖、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、酵母提取物、抗坏血酸钠中的至少两种。

2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，以重量份数计包括：

3.根据权利要求2所述的冻干保护剂，

4.根据权利要求1所述的冻干保护剂，所述冻干保护剂以重量份数计包括：500～900份麦芽糖、80～200份甘油和300～500份酵母提取物。

5.根据权利要求4所述的冻干保护剂，可选地，所述冻干保护剂以重量份数计包括：600份麦芽糖，100份甘油，和400份酵母提取物；

6.一种沙门氏菌的冻干品，其包括权利要求1～5任一所述冻干保护剂以及与所述冻干保护剂混合并进行冷冻干燥形成固态样品的沙门氏菌。

7.根据权利要求5所述的冻干保护剂，所述沙门氏菌按生化反应分，包括ⅰ型、ii型、iii型和iv型沙门氏菌；可选地，所述沙门氏菌选自伤寒沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌和仙台沙门氏菌；可选地，所述沙门氏菌为猪霍乱沙门氏菌c500。

8.一种沙门氏菌冻干品的制备方法，包括：

9.根据权利要求8所述的制备方法，可选地，所述预冻包括：将所述沙门氏菌菌液与所述冻干保护剂的混合物于常压下以0.5～1.5℃/min的降温速率降至-50～-40℃；

10.权利要求1～5任一所述冻干保护剂在制备沙门氏菌冻干品中的应用。

技术总结
本申请涉及沙门氏菌的冻干保护剂、冻干品的制备方法及应用。该冻干保护剂，其选自麦芽糖、葡萄糖、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、酵母提取物、抗坏血酸钠中的至少两种。该冻干品包括该冻干保护剂以及与该冻干保护剂混合并进行冷冻干燥形成固态样品的沙门氏菌。该冻干品不仅方便贮藏和运输，而且具有十分高的菌存率，提高了菌株活性的效率。

技术研发人员：熊家军,吕志远,刘丽娟,史月军,韦唯,杨翔淞,舒永兰
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5