一种转基因玉米VB15外源插入片段的旁侧序列及其应用

本发明属于分子生物学，具体涉及一种转基因玉米vb15外源插入片段的旁侧序列及其应用。

背景技术：

1、虫害（尤其是玉米螟害）会造成玉米的严重减产，抗虫转基因玉米是世界上最早开展的研究性状之一。抗虫基因主要来源于苏云金芽孢杆菌的bt杀虫蛋白，其作用机理是使昆虫胃肠产生穿孔，从而使昆虫代谢紊乱而死亡。抗虫转基因玉米mon810和mon863已经进入商品化生产多年。在mon810转基因玉米中表达的cry1ab蛋白能有效防治玉米螟，在mon863中表达的cry3bb对危害玉米根部的害虫有很好的防治效果。先正达集团也开发了表达cry1ab蛋白的转基因抗虫玉米bt11和bt176。先锋公司和陶氏化学公司共同开发了含cry34和cry35的抗玉米根部害虫的转基因玉米。

2、截止目前，国产转基因植酸酶玉米bvla430101、抗虫耐除草剂玉米dbn9936、瑞丰125和耐除草剂玉米dbn9858等已被认为符合安全标准，将外源插入片段转入玉米种构建转基因玉米品种是常用手段。随着转基因玉米的商业化应用将加快玉米产业升级。为今后转基因玉米的可持续利用，有必要研发更多的抗性优良转化体。外源插入片段的旁侧序列和依据此旁侧序列建立的检测方法，是进行监督管理的一个重要指标。因此，有必要获得抗性优良转化玉米品种的旁侧序列，并建立鉴定体系，对抗虫转基因玉米品种进行有效监管。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供转基因玉米vb15外源插入片段的旁侧序列，以实现对转基因玉米vb15进行有效监管。

2、为了实现上述目的，本发明提供了转基因玉米vb15外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列包括5'端旁侧序列和/或3'端旁侧序列；

3、所述5'端旁侧序列为seq id no.1所示的序列或seq id no.1所示序列的特异性片段；

4、所述3'端旁侧序列为seq id no.2所示的序列或seq id no.2所示序列的特异性片段；

5、所述转基因玉米vb15保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.27565。

6、本发明还提供了用于检测转基因玉米vb15的dna片段，所述dna片段包括dna片段1和/或dna片段2；

7、所述dna片段1为seq id no.5所示的序列或seq id no.5所示序列的特异性片段；

8、所述dna片段2为seq id no.6所示的序列或seq id no.6所示序列的特异性片段。

9、优选的，所述seq id no.5所示序列的特异性片段为seq id no.7或seq id no.8所示的序列；

10、所述seq id no.6所示序列的特异性片段为seq id no.9所示的序列。

11、本发明还提供了用于检测转基因玉米vb15的引物，所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如seq id no.11、seq id no.12和seq id no.15中的任意一种所示；所述下游引物的核苷酸序列如seq id no.13、seq id no.14和seq id no.16中的任意一种所示。

12、本发明还提供了用于检测转基因玉米vb15的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的引物。

13、本发明还提供了上述技术方案所述旁侧序列或dna片段或引物或试剂盒在检测转基因玉米vb15和/或转基因玉米vb15相关材料中的应用。

14、优选的，所述转基因玉米vb15相关材料包括转基因玉米vb15的亲本和/或后代。

15、优选的，所述检测的对象包括植株、组织、种子、转基因玉米vb15制品和转基因玉米vb15相关材料的制品中的一种或多种。

16、本发明还提供了一种检测转基因玉米vb15或转基因玉米vb15相关材料的方法，包括如下步骤：提取待测材料的dna，利用上述技术方案所述的引物对所述dna进行扩增，若得到阳性扩增产物，则所述待测材料含有转基因玉米vb15的成分。

17、本发明还提供了一种对昆虫具有抗性的玉米的种植方法，包括种植玉米种子；

18、所述玉米种子的基因组中包含上述技术方案所述的dna片段；所述玉米种子为转基因玉米vb15。

19、有益效果：

20、本发明将改造的cry1ab基因（专利申请号cn202010553538.0）和vip3基因（专利申请号cn202010554016.2）构建转化载体p3301ubiabubivip3，通过农杆菌介导法转入到玉米基因组中，获得了一个抗虫转基因玉米品种：玉米vb15，基于转基因玉米vb15获得其外源插入片段的旁侧序列，包括5'端旁侧序列和/或3'端旁侧序列；所述5'端旁侧序列为seq idno.1所示的序列或其特异性片段；所述3'端旁侧序列为seq id no.2所示的序列或其特异性片段，基于所述旁侧序列能够对转基因玉米vb15及其相关材料进行特异性检测和鉴定，能更好的对转基因玉米进行监督管理。

技术特征：

1.转基因玉米vb15外源插入片段的旁侧序列，其特征在于，所述旁侧序列包括5'端旁侧序列和/或3'端旁侧序列；

2.用于检测转基因玉米vb15或转基因玉米vb15相关材料的dna片段，其特征在于，所述dna片段包括dna片段1和/或dna片段2；

3.根据权利要求2所述的dna片段，其特征在于，所述seq id no.5所示序列的特异性片段为seq id no.7或seq id no.8所示的序列；

4.用于检测转基因玉米vb15的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如seq id no.11、seq id no.12和seq id no.15中的任意一种所示；所述下游引物的核苷酸序列如seq id no.13、seq id no.14和seq id no.16中的任意一种所示；

5.用于检测转基因玉米vb15的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4所述的引物；

6.权利要求1所述的旁侧序列或权利要求2或3所述的dna片段或权利要求4所述的引物或权利要求5所述的试剂盒在检测转基因玉米vb15和/或转基因玉米vb15相关材料中的应用；

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述转基因玉米vb15相关材料包括转基因玉米vb15的亲本和/或后代。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测的对象包括植株、组织、种子、转基因玉米vb15制品和转基因玉米vb15相关材料的制品中的一种或多种。

9.一种检测转基因玉米vb15或转基因玉米vb15相关材料的方法，其特征在于，包括如下步骤：提取待测材料的dna，利用权利要求4所述的引物对所述dna进行扩增，若得到阳性扩增产物，则所述待测材料含有转基因玉米vb15的成分；

10.一种对昆虫具有抗性的玉米的种植方法，其特征在于，包括种植玉米种子；

技术总结
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种转基因玉米VB15外源插入片段的旁侧序列及其应用。本发明基于转基因玉米VB15，获得其外源插入片段的旁侧序列，包括5'端旁侧序列和/或3'端旁侧序列；所述5'端旁侧序列为SEQ ID NO.1所示的序列或SEQ ID NO.1所示序列的特异性片段；所述3'端旁侧序列为SEQ ID NO.2所示的序列或SEQ ID NO.2所示序列的特异性片段，基于所述旁侧序列能够对转基因玉米VB15及其相关材料进行特异性检测和鉴定，能更好的对转基因玉米进行监督管理。

技术研发人员：刘允军,刘艳,王国英,任珍静,陈岩,施建琴
受保护的技术使用者：中国农业科学院作物科学研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16