数字PCR检测装置和PCR检测方法与流程

本发明涉及数字pcr检测装置。

背景技术：

1、数字pcr(polymerase chain reaction：聚合酶链反应)是高灵敏度检测核酸的技术，与以往的实时定量pcr相比，能够检测出现率低的基因变异。专利文献1中公开了一种dna检测方法，作为使用数字pcr的dna检测方法，在含有dna和与dna杂交的荧光标记探针的液滴中，测定dna与荧光标记探针的溶解温度。

2、此外，专利文献2中公开了下述构成：利用具有能够各自单独进行温度控制的多个单一容器热循环仪的多容器热循环仪阵列，能够使反应液的温度梯度下降，或者为了对可妨碍光学检查的气泡进行脱气而使反应液振动。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：日本特开2018-108063号公报

6、专利文献2：日本特表2010-508813号公报

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、数字pcr中，将含有检测对象dna的试样划分为大量的微小区域，对各个微小区域进行pcr，进行各微小区域内存在的dna种类的辨别。专利文献1所示的数字pcr中，使用试样中的对象基因和与对象基因杂交的荧光标记探针，检测其溶解曲线并进行分析，从而辨别对象基因的种类。为了检测溶解曲线，进行荧光标记探针荧光强度的温度依赖性检测。

3、检测对象基因的种类有多个，例如包括野生型及其变异型的基因。溶解曲线因对象基因的种类和荧光标记探针而异，因此可以通过检测溶解曲线，辨别对象基因的种类。但检测变异型基因等情况下，也存在其碱基序列与野生型的碱基序列仅相差1个碱基的情况。因此，溶解曲线的差别小，为了高精度辨别基因种类，有必要高精度检测荧光强度、溶解曲线。此外，同时检测大量基因的情况下，使检测的波动更小变得重要。

4、作为使荧光强度、溶解曲线的检测精度下降的一个要因，可列举气泡的存在。如果温度上升时试样附近产生气泡，则对荧光检测产生影响，溶解曲线的检测精度和基因种类的辨别精度下降。此外，虽然为了辨别多个基因种类而进行多个波长的荧光检测，但是由于荧光标记探针的光谱的扩展，会在某一荧光检测中，产生另一波长的荧光检测的光的泄漏。这些情况下，高精度检测荧光强度、溶解曲线也变得重要。

5、本发明是鉴于这样的情况做出的，其目的之一在于，提供可去除气泡的影响而高精度检测溶解曲线的数字pcr装置。根据本说明书的记载和附图，本发明的前述以及其他目的和新的特征得以明确。

6、用于解决课题的方法

7、本发明一个方式涉及的数字pcr检测装置是检测试样内所含dna的数字pcr检测装置，包括：控制包括多个微小区域的试样容器的温度的温度调节器，前述试样容器被供应有含有荧光标记探针和检测对象dna的试样；检测前述多个微小区域的荧光强度的荧光检测部；以及控制前述温度调节器和前述荧光检测部的控制部。前述控制部的特征在于，控制前述温度调节器使前述试样容器的温度上升、将前述试样容器内产生的气泡除去后，一边控制前述温度调节器使前述试样容器的温度下降一边检测前述多个微小区域的荧光强度，检测前述多个微小区域的溶解曲线。

8、发明效果

9、根据本发明，可以提供可去除气泡的影响而高精度检测荧光强度和溶解曲线、可高精度辨别基因种类的数字pcr检测装置。

技术特征：

1.一种数字pcr检测装置，其特征在于，为检测试样内所含的dna的数字pcr检测装置，

2.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，进一步具备：

3.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，进一步具备倾斜台，其构成为可保持所述试样容器相对于水平面倾斜。

4.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述控制部在控制所述温度调节器使所述试样容器的温度上升后，一边控制所述温度调节器使所述试样容器的温度下降一边对于所述多个微小区域分别检测所述多个荧光色的荧光强度。

5.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述控制部使用所述多个荧光色的荧光强度中的两个荧光色的荧光强度之比来辨别所述检测对象dna的种类。

6.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述辨别结果包括每个所述荧光色的溶解温度中的至少一个。

7.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述辨别结果包括表示所述多个荧光色的荧光强度中的至少一个的轴和表示所述溶解温度的轴。

8.根据权利要求7所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述辨别结果包括表示所述多个荧光色的荧光强度的多个轴和表示所述溶解温度的轴。

9.根据权利要求1所述的数字pcr检测装置，其特征在于，所述辨别结果包括以能够识别所述多个荧光色中的每一个的方式而区分的、包含表示所述荧光强度和所述溶解温度的轴的多个图表。

10.一种pcr检测方法，其特征在于，为检测试样内所含的dna的pcr检测方法，包括：

11.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，进一步包括：调整所述试样容器相对于水平面的倾角，将气泡除去。

12.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，进一步包括：将所述试样容器保持为相对于水平面倾斜的状态，将气泡除去。

13.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，检测所述多个荧光色的荧光强度包括：

14.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，辨别所述检测对象dna的种类包括：

15.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，所述辨别结果包括每个所述荧光色的溶解温度中的至少一个。

16.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，所述辨别结果包括表示所述多个荧光色的荧光强度中的至少一个的轴和表示所述溶解温度的轴。

17.根据权利要求16所述的pcr检测方法，其特征在于，所述辨别结果包括表示所述多个荧光色的荧光强度的多个轴和表示所述溶解温度的轴。

18.根据权利要求10所述的pcr检测方法，其特征在于，所述辨别结果包括以能够识别所述多个荧光色中的每一个的方式而区分的、包含表示所述荧光强度和所述溶解温度的轴的多个图表。

技术总结
提供一种可高精度检测溶解曲线的数字PCR检测装置和PCR检测方法。该数字PCR检测装置为检测试样内所含的DNA的数字PCR检测装置，包括：控制被供应试样的试样容器的温度的温度调节器，所述试样容器以平面阵列状配置了作为多个微小区域且直径为10～100μm的孔，所述试样含有由不同的荧光色素修饰的多个荧光标记探针和检测对象DNA；对于所述多个微小区域分别检测多个荧光色的荧光强度的荧光检测部；以及控制所述温度调节器和所述荧光检测部的控制部；所述控制部一边控制所述温度调节器来控制所述试样容器的温度，一边对于所述多个微小区域分别检测多个荧光色的荧光强度，对于所述多个微小区域分别检测多个荧光色的溶解曲线。

技术研发人员：中川树生,田中淳子,岛崎让,原田邦男
受保护的技术使用者：株式会社日立制作所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22