一种与鸡脂肪沉积相关的miRNA家族及其应用的制作方法

本发明涉及分子标记，尤其涉及一种与鸡脂肪沉积相关的mirna家族及其应用。

背景技术：

1、在畜牧业生产中，脂肪性状一直受到广泛关注，其不仅与动物的饲料报酬、抗病力、繁殖性能及肉用性能密切相关，最主要关系到肉品质的质量和风味。腹部脂肪沉积是一种负的经济特征，过度脂肪沉积会导致饲料效率下降，从而增加育种成本，被丢弃的腹部脂肪还会造成环境污染。与腹部脂肪不同，肌内脂肪却是有益的特征，其作为动物肌肉的重要组成部分，存在于肌纤维内部与肌束之间，作为能量储存的一种形式，与肌肉嫩度、香味、多汁性呈显著的正相关。因此，高肌内脂肪和低腹脂沉积是现代优质肉鸡育种的目标。

2、mirna是一类非编码单链rna，在人类肥胖、脂肪生成、脂肪细胞增值与分化及胰岛素耐受性中起到重要作用，因此获得与主选性状及其关键基因相关的mirna作为分子标记，对实现重要经济性状的早期选择具有重要意义。研究证明，鸡的mir-30家族包括gga-mir-30a、gga-mir-30b、gga-mir-30c、gga-mir-30d和gga-mir-30e 5个成员。

3、授权公告号为cn 112375759 b的专利，公开了一种与鸡肝脏脂质沉积相关的mirna及其应用，发现了mir-146a在调控鸡肝脏脂质沉积中的应用，并提供了其前体pri-mir-146a，但是该研究也只是证明了mir-146a能够调控鸡肝脏脂质沉积。并没有研究肌内脂肪和腹部脂肪。

4、论文：circadgrf5/mir-200b-3p/sesn1调控固始鸡腹部前脂肪细胞增殖与分化的作用机制研究。河南农业大学硕士学位论文。论文中公开mir-200b-3p可以直接靶向sesn1来调控固始鸡腹部前脂肪细胞的增殖和分化。

5、授权公告号为cn 105087584 b的专利，为发明人在2015年之前作出的研究，该研究筛选到的mirna为gga-mir-19b-3p，对于该mirna，只是研究并证明了其能够调控鸡腹脂沉积。

6、由于鸡脂肪沉积是受很多的mirna共同作用调控，一个mirna不能起到决定性作用，但是，上述论文和授权公告号为cn 105087584 b的专利(发明人自己的专利)，均是只研究了一个核苷酸序列，并不能更好的分析鸡脂肪沉积的作用机理。

7、另外，上述论文和授权公告号为cn 105087584 b的专利(发明人自己的专利)，只对鸡腹部脂肪进行研究，为单一的分子标记，并没有研究肌内脂肪，无法获得腹部脂肪和肌内脂肪的差异性分子机制；但是由于腹部脂肪沉积是一种负的经济特征，肌内脂肪却是有益的经济特征，因此，单一的分子标记无法实现优良经济性状的早期选择。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提出了一种与鸡脂肪沉积相关的mirna家族及其应用。其可通过调控靶基因mgll的表达，调控鸡脂肪沉积，因此可作为分子标记，使高肌内脂肪和低腹脂沉积专门化品系的育成速度加快。

2、本发明的技术方案是这样实现的：

3、一方面，本发明提供了一种与鸡脂肪沉积相关的mirna家族，其中，mirna家族为gga-mir-30家族，其核苷酸序列为：

4、gga-mir-30a：tgttaaacatcctcgactggaa；

5、gga-mir-30b：tgtaaacatcctacactcagc；

6、gga-mir-30c：tgtaaacatcctacactctcagct；

7、gga-mir-30d：tgtaaacatccccgactggaag；

8、gga-mir-30e：tgtaaacatccttgactgg；

9、gga-mir-30家族可以促进鸡腹部脂肪和肌内脂肪的沉积。

10、另外，gga-mir-30家族通过调控mgll基因的表达，调控鸡的腹部脂肪沉积；但是gga-mir-30家族对肌内脂肪沉积的调控并不是通过mgll来实现。因此，如果需要对肉鸡的腹部脂肪(负经济特征)和肌内脂肪(有益经济特征)这两类性状进行早期选择，可以通过对mgll基因的控制，实现高肌内脂肪和低腹脂沉积的选育。

11、进一步地，本发明中，gga-mir-30家族通过抑制mgll基因的表达，促进鸡腹部脂肪的沉积。

12、进一步地，本发明通过qpcr检测腹部脂肪细胞和肌内脂肪细胞中gga-mir-30家族的5个成员的表达量。

13、进一步地，本发明进行qpcr检测时，针对5个成员采用的特异性扩增引物序列分别如下：

14、gga-mir-30a：tgtaaacatcctcgactggaag；

15、gga-mir-30b：tgtaaacatcctacactcagc；

16、gga-mir-30c：tgtaaacatcctacactctcagct；

17、gga-mir-30d：tgtaaacatccccgactggaag；

18、gga-mir-30e：tgtaaacatccttgactgg。

19、另一方面，本发明还提供了gga-mir-30家族作为分子标记，在加快高肌内脂肪和低腹脂沉积专门化品系的育成速度中的应用。

20、可将gga-mir-30家族mimics或基于gga-mir-30构建的过表达载体，作为添加剂，用于调控鸡腹部脂肪沉积和肌内脂肪沉积，加快高肌内脂肪和低腹脂沉积专门化品系的育成速度，并且对gga-mir-30家族mimics进行的保护碱基修饰以及针对gga-mir-30家族前体设计的过表达载体均包含在本发明的保护范围内。

21、本发明与鸡脂肪沉积相关的mirna家族及其应用，相对于现有技术具有以下有益效果：

22、1、提供了gga-mir-30家族中五个特殊的核苷酸序列，并针对五个特殊的核苷酸序列分别设计了特殊的引物。

23、2、通过五个特殊的核苷酸序列，深入研究鸡脂肪沉积的作用机理，获得高肌内脂肪和低腹脂沉积双重性状的、可控的分子标记，并通过构建gga-mir-30家族的模拟物，外源过表达gga-mir-30家族，发现gga-mir-30家族通过调控mgll基因的表达进而调控鸡脂肪沉积。

24、3、通过改善鸡的脂肪沉积的gga-mir-30家族标记，运用这些标记对优质肉鸡腹脂和肌内脂肪沉积这两类复杂性状进行早期选择，缩短世代间隔。

技术特征：

1.一种与鸡脂肪沉积相关的mirna家族，其特征在于：所述mirna家族为gga-mir-30家族，其核苷酸序列为：

2.根据权利要求1所述的mirna家族，其特征在于，所述gga-mir-30家族通过抑制mgll基因的表达，调控鸡的腹部脂肪沉积。

3.根据权利要求1所述的mirna家族，其特征在于，腹部脂肪细胞和肌内脂肪细胞中，gga-mir-30家族的5个成员的表达量通过qpcr检测。

4.根据权利要求3所述的mirna家族，其特征在于，在进行qpcr检测时，针对5个成员采用的特异性扩增引物序列分别如下：

5.一种如权利要求1所述的mirna家族的应用，其特征在于：所述gga-mir-30家族作为分子标记，在加快高肌内脂肪和低腹脂沉积专门化品系育成速度中的应用。

技术总结
本发明适用于分子标记应用领域，提出了一种与鸡脂肪沉积相关的miRNA家族及其应用，miRNA家族为gga‑miR‑30家族，其核苷酸序列为：gga‑miR‑30a：TGTTAAACATCCTCGACTGGAA；gga‑miR‑30b：TGTAAACATCCTACACTCAGC；gga‑miR‑30c：TGTAAACATCCTACACTCTCAGCT；gga‑miR‑30d:TGTAAACATCCCCGACTGGAAG；gga‑miR‑30e：TGTAAACATCCTTGACTGG；gga‑miR‑30家族通过调控MGLL基因的表达，调控鸡的腹部脂肪沉积，同时，gga‑miR‑30家族对肌内脂肪沉积的调控并不是通过MGLL来实现。综上，本发明通过调控靶基因MGLL的表达，调控鸡脂肪沉积，因此可作为分子标记，使高肌内脂肪和低腹脂沉积专门化品系的育成速度加快。

技术研发人员：黄华云,韩威,梁忠,赵振华,王钱保,李春苗,黄正洋,吴兆林,李瑞瑞,夏晓萍,汪芳杰,杨苗苗
受保护的技术使用者：江苏省家禽科学研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15