一种位于大豆12号染色体上的大豆粒油分含量相关的分子标记及其应用

本发明属于植物鉴定领域，具体涉及一种位于大豆12号染色体上的大豆粒油分含量相关的分子标记及其应用。

背景技术：

1、大豆有着丰富的营养成分，油分在20％左右。人们可以通过食用大豆用以补充所需的营养物质，并且可以预防人体的心血管疾病，大豆同时是重要的油料作物，可以被加工为食用油，可以满足人们的饮食需求，同时主要由五种脂肪酸组成，而脂肪酸可以预防心脏病、癌症等。随着人们的生活水平日益提高，越来越多的人更多的注重于食用健康与食物的营养价值，因此对大豆的需求很大，但我国的大豆更多的是依赖于从其他国家进口，所以我国急需提高大豆油分含量及培育高油大豆品种，满足人们的日常所需。

2、大豆子粒的油分是品质相关性状，比较复杂的数量性状，受到多个基因控制，一直以来受到遗传特性和育种方法的限制，传统方法过于缓慢，随着科技的不断进步，分子辅助选择被提出，在传统杂交育种方法的基础上利用分子标记与决定目标性状的基因紧密连锁，通过对标记的选择来实现对性状的选择，大幅度提高育种效率，实现定向改良大豆品种的作用即可以选择出高油分的大豆品种。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了快速和准确的筛选高油分优质大豆品种。

2、本发明提供一种大豆粒油分含量相关的分子标记，所述分子标记的基因为glyma.12g018300，且在847位上的核苷酸位点为a或g。

3、本发明提供一种扩增上述的分子标记的引物序列，正向引物序列为seq id no.2或seq id no.3所示；反向引物序列如seq id no.1所示。

4、本发明提供一种大豆粒油分含量相关的snp位点，所述snp位点位于大豆的12号染色体上的1280727位，所述位点的碱基为为a或g。

5、本发明提供一种扩增上述的snp位点的引物序列，正向引物序列为seq id no.2或seq id no.3所示；反向引物序列如seq id no.1所示。

6、本发明提供一种上述的分子标记、上述的引物序列、上述的snp位点或上述的引物序列在制备鉴定高油分含量的大豆或低油分含量的大豆的试剂盒中的应用。

7、本发明提供一种鉴定高油分含量的大豆或低蛋白含量的大豆的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物序列。

8、进一步地限定，所述试剂盒还包括master mix和水。

9、本发明提供一种鉴定大豆油分含量的方法，所述方法的具体步骤如下：

10、步骤1：提取待检测大豆的dna；

11、步骤2：利用权利要求2所述的分子标记的引物序列或权利要求4所述的snp位点的引物序列进行pcr反应，检测待检测品种的大豆为aa基因型则待检测品种的大豆为低油分含量的大豆，若为gg基因型则待检测品种的大豆为高油分含量的大豆。

12、进一步地限定，步骤2中的pcr反应的条件为：(1)热启动(hot start)：在95℃下保持30s，进行1个循环；(2)渐进降温(touch down)：在95℃下保持60s，然后在63℃下保持20s，每个循环降温0.8℃，由63℃到55℃，共进行10个循环。(3)pcr扩增(pcr)：在95℃下保持60s，在55℃下保持20s，共进行30个循环。(4)平板读取(plate read)：在37℃下保持60s，进行1个循环。

13、进一步地限定，步骤2中的aa基因型为snp位点的碱基为a，gg基因为snp位点的碱基为g。

14、有益效果：本发明利用了来自5个资源杂交群体材料的1029份资源材料为实验群体。在相应亲本中序列比对初步筛选出发生突变的基因，针对突变位点设计引物选择有效的分子标记，采用snp分子标记技术中的kasp技术在资源材料中进行验证，最后通过单倍型分析在重测序群体中再次验证并进行基因聚合。目的是确定有效的功能标记与重要候选基因，主要研究结果如下：

15、(1)得到并开发出与油分含量相关的snp标记4个：chr3：43490555、chr12：1280727、chr17：5830450、chr17：5831106。

16、(2)得到与大豆油分含量相关snp标记附近的重要候选基因为glyma.03g219900、glyma.12g018300、glyma.17g074400。

技术特征：

1.一种大豆粒油分含量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记的基因为glyma.12g018300，且在847位上的核苷酸位点为a或g。

2.扩增权利要求1所述的分子标记的引物序列，其特征在于，正向引物序列为seq idno.2或seq id no.3所示；反向引物序列如seq id no.1所示。

3.一种大豆粒油分含量相关的snp位点，其特征在于，所述snp位点位于大豆的12号染色体上的1280727位，所述位点的碱基为为a或g。

4.扩增权利要求3所述的snp位点的引物序列，其特征在于，正向引物序列为seq idno.2或seq id no.3所示；反向引物序列如seq id no.1所示。

5.权利要求1所述的分子标记、权利要求2所述的引物序列、权利要求3所述的snp位点或权利要求4所述的引物序列在制备鉴定高油分含量的大豆或低油分含量的大豆的试剂盒中的应用。

6.一种鉴定高油分含量的大豆或低蛋白含量的大豆的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2或权利要求4所述的引物序列。

7.根据权利要求6所述的得试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括master mix和水。

8.一种鉴定大豆油分含量的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤2中的pcr反应的条件为步骤2中的pcr反应的条件为：(1)热启动(hot start)：在95℃下保持30s，进行1个循环；(2)渐进降温(touch down)：在95℃下保持60s，然后在63℃下保持20s，每个循环降温0.8℃，由63℃到55℃，共进行10个循环。(3)pcr扩增(pcr)：在95℃下保持60s，在55℃下保持20s，共进行30个循环。(4)平板读取(plate read)：在37℃下保持60s，进行1个循环。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤2中的aa基因型为snp位点的碱基为a，gg基因为snp位点的碱基为g。

技术总结
本发明提供一种位于大豆12号染色体上的大豆粒油分含量相关的分子标记及其应用。属于植物鉴定领域。为了快速和准确的筛选高油分优质大豆品种。本发明提供一种大豆粒油分含量相关的分子标记，所述分子标记的基因为Glyma.12G018300，且在847位上的核苷酸位点为A或G，以及上述这些标记在制备检测大豆高油分含量的试剂盒中的应用和筛选方法。通过对标记的选择来实现对性状的选择，大幅度提高育种效率，实现定向改良大豆品种的作用即可以选择出高油分的大豆品种。

技术研发人员：韩雪,齐照明,冯学珍,辛大伟,胡利民,杨明亮,刘春燕,陈庆山,武小霞
受保护的技术使用者：东北农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29