猪源非解乳糖链球菌噬菌体及其应用的制作方法

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种猪源非解乳糖链球菌噬菌体及其应用。

背景技术：

1、非解乳糖链球菌(streptococcus alactolyticus)是一种兼性厌氧的革兰氏阳性球菌状细菌，厚壁菌门，属于lancefield d组，镜检为球状或椭圆，呈链状排布，不形成芽孢。在绵羊血平板上展示α溶血现象，尿素酶、七叶苷阳性、；明胶酶、酪氨酸酶、过氧化氢酶、精氨酸脱氨均为阴性、可在6.5％nacl中生长。它可以发酵葡萄糖、纤维素二糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、甘露糖、水杨苷和蔗糖，但不能发酵阿拉伯糖、甘露醇、乳糖、甘油、棉子糖、核糖、山梨醇、海藻糖或木糖。

2、非解乳糖链球菌属于马链球菌/牛链球菌复合体(sbsec)中的一种，其最初发现于猪的肠道，是一种人畜共患传染病的条件致病菌。近些年从人类临床标本中鲜有分离得到，常发现于人和动物的胃肠道中。根据表型特征将非解乳糖链球菌归为绿色链球菌的唾液类链球菌。根据链球菌属的基于基因分析(16s rrna)分类原则，它现在被纳入牛链球菌/马链球菌复合体。有文献报道显示，非解乳糖链球菌为二尖瓣上感染性心内膜炎(ie)的病原体，可引起严重的心脏反流。

3、牛链球菌/马链球菌复合体(sbsec)是一组非肠球菌d组链球菌，在人和动物中都有定植。sbsec的分类发生了巨大的变化，目前由7个(亚)种组成，根据序列特征分为4个分支：牛链球菌、马链球菌、婴儿链球菌和非解乳糖链球菌分支。由于胃肠道疾病，它们透过肠黏膜屏障切换为条件致病菌，引起菌血症和器官损害。在动物中，sbsec是瘤胃酸中毒、潜在的蹄叶炎和感染性心内膜炎(ie)的病原体。该复合物在29～55％的炎症性肠病和结肠癌患者中被分离出来，并与高达13％的先天性心内膜炎病例有关。感染后的表现为感染性心内膜炎(ie)、菌血症、骨关节感染、脑膜炎和胆道感染等。此外，sbsec与结肠病理病变的关系已被大量报道。

4、目前，对于致病性链球菌感染，一般使用抗生素进行治疗，存在固有抗药性，且随着抗生素使用，抗药性增强随之出现耐药菌株。

5、然而，噬菌体来源于环境，作为一类细菌依赖性病毒专门侵噬细菌，面对抗生素残留及细菌耐药现象的频发，噬菌体又成为了新型抗菌制剂的候选。由于其具有自我高效复制、特异针对病原、不影响正常菌群且不产生抗性等特点，目前在国内外已有较多成功应用的报道，噬菌体在裂解细菌中发挥的作用方式更为直接。目前没有能够同时针对多种致病性非解乳糖链球菌的噬菌体。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中缺乏能够同时裂解多种致病性非解乳糖链球菌的噬菌体的技术问题，提出一种猪源非解乳糖链球菌噬菌体及其应用，该噬菌体rkp-psa-22009对猪养殖环境中的致病性非解乳糖链球菌具有强裂解作用且能稳定传代，可用于制备猪瘤胃酸中毒、蹄叶炎和感染性心内膜炎等疾病的防治药物。

2、为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、猪源非解乳糖链球菌噬菌体rkp-psa-22009，其保藏编号为cgmcc no.45262，于2022年08月31日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，分类命名为非解乳糖链球菌噬菌体。

4、在一实施方式中，当温度在60℃以下时，所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体的效价保持在107～108pfu/ml。

5、一种猪源非解乳糖链球菌噬菌体在制备杀菌药物、生物制品或制备非解乳糖链球菌引起的传染病药物中的应用。

6、在一实施方式中，所述生物制品为饲料添加剂和消毒剂/清洁剂，其中所述饲料添加剂和消毒剂/清洁剂为以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化的所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂。

7、在一实施方式中，所述非解乳糖链球菌包括致病性非解乳糖链球菌，所述致病性非解乳糖链球菌包括a型致病性非解乳糖链球菌、b型致病性非解乳糖链球菌、c型致病性非解乳糖链球菌以及d型致病性非解乳糖链球菌。

8、在一实施方式中，所述传染病包括猪瘤胃酸中毒、蹄叶炎和感染性心内膜炎。

9、一种杀菌药物，其有效成分包括猪源非解乳糖链球菌噬菌体。

10、一种消毒剂或清洁剂，为以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体的单一制剂或以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂，用于防治养殖环境中非解乳糖链球菌的污染。

11、在一实施方式中，所述消毒剂或清洁剂的剂型为液体、冻干粉或片剂；所述养殖环境包括猪体内、猪体表、猪养殖场所地面、猪养殖场所空气、猪饲料、饮水以及养殖器具。

12、一种饲料添加剂，为以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂，添加在猪饲料中，用于防治养殖过程中非解乳糖链球菌的污染。

13、在一实施方式中，杀菌药物或消毒剂或清洁剂或饲料添加剂，非解乳糖链球菌包括致病性非解乳糖链球菌，根据16s起源进化分析，致病性非解乳糖链球菌包括a型致病性非解乳糖链球菌、b型致病性非解乳糖链球菌、c型致病性非解乳糖链球菌以及d型致病性非解乳糖链球菌。

14、与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：

15、1、本发明提供的猪源非解乳糖链球菌噬菌体rkp-psa-22009，能对猪养殖环境中的致病性非解乳糖链球菌具有强裂解效用，为工业化生产噬菌体用于养殖环境中猪瘤胃酸中毒、蹄叶炎和感染性心内膜炎(ie)等疾病的防治提供了良好的噬菌体来源；

16、2、本发明提供的猪源非解乳糖链球菌噬菌体rkp-psa-22009在传代30次的条件下，仍然可以保持较高水平的效价，该噬菌体具有较强的遗传稳定性；

17、3、本发明提供的猪源非解乳糖链球菌噬菌体rkp-psa-22009可用于制备杀菌药物、生物制品或制备非解乳糖链球菌引起的传染病药物。

技术特征：

1.猪源非解乳糖链球菌噬菌体rkp-psa-22009，其特征在于，其保藏编号为cgmccno.45262，于2022年08月31日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，分类命名为非解乳糖链球菌噬菌体。

2.根据权利要求1所述的猪源非解乳糖链球菌噬菌体，其特征在于，当温度在60℃以下时，所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体的效价保持在107～108pfu/ml。

3.如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体在制备杀菌药物、生物制品或制备非解乳糖链球菌引起的传染病药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述生物制品为饲料添加剂和消毒剂/清洁剂，其中所述饲料添加剂和消毒剂/清洁剂为以纯化的猪源非解乳糖链球菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化的所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述非解乳糖链球菌包括致病性非解乳糖链球菌，所述致病性非解乳糖链球菌包括a型致病性非解乳糖链球菌、b型致病性非解乳糖链球菌、c型致病性非解乳糖链球菌以及d型致病性非解乳糖链球菌；

6.杀菌药物，其特征在于，其有效成分包括如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体。

7.消毒剂或清洁剂，其特征在于，为以纯化的如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体的单一制剂或以纯化的如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂，用于防治养殖环境中非解乳糖链球菌的污染。

8.根据权利要求7所述的消毒剂或清洁剂，其特征在于，所述消毒剂或清洁剂的剂型为液体、冻干粉或片剂；所述养殖环境包括猪体内、猪体表、猪养殖场所地面、猪养殖场所空气、猪饲料、饮水以及养殖器具。

9.饲料添加剂，其特征在于，为以纯化的如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化的如权利要求1或2所述猪源非解乳糖链球菌噬菌体为主要成分制备的复配制剂，添加在猪饲料中，用于防治养殖过程中非解乳糖链球菌的污染。

10.根据权利要求6所述的杀菌药物或根据权利要求7所述的消毒剂或清洁剂或根据权利要求9所述的饲料添加剂，其特征在于，所述非解乳糖链球菌包括致病性非解乳糖链球菌，所述致病性非解乳糖链球菌包括a型致病性非解乳糖链球菌、b型致病性非解乳糖链球菌、c型致病性非解乳糖链球菌以及d型致病性非解乳糖链球菌。

技术总结
本发明公开一株保藏编号为CGMCC No.45262的猪源非解乳糖链球菌噬菌体，该噬菌体属于有尾病毒目肌尾病毒科，具有呈多面体立体对称的头部和尾部，头部直径为21nm，尾部长约31nm；在固体培养基上可形成大小均一、边缘光滑的噬菌斑。该噬菌体对猪养殖环境中的非解乳糖链球菌，特别是致病性非解乳糖链球菌具有良好的裂解效果，具有较好的生物遗传稳定性、热稳定性以及较宽的裂解图谱；该噬菌体在防治非解乳糖链球菌引起的传染病药物制剂、杀菌剂及饲料添加剂等多个方面具有十分广阔的应用前景。

技术研发人员：杜新永,刘长太,崔翠,腾雨晴,王甜甜
受保护的技术使用者：青岛润达生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1