本发明涉及生物，具体涉及一种检测早期非小细胞肺癌血清标志物的联合检测方法，准确性和灵敏性更高，有助于早期非小细胞肺癌患者的早期诊断。
背景技术：
1、肺癌是全球发病率最高且最具侵袭性的恶性肿瘤之一，并且也是导致癌症相关死亡的主要原因之一。根据世界卫生组织的分类，肺癌可以分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(nsclc)，其中非小细胞肺癌约占总肺癌病例的85％。目前，完全切除手术是早期非小细胞肺癌最有效的治疗方法。然而，据报道，由于早期缺乏特异性症状，大多数非小细胞肺癌患者在诊断时已进入晚期阶段，导致预后不佳。早期筛查和治疗对改善非小细胞肺癌患者的预后至关重要。血清癌胚抗原(cea)在早期诊断非小细胞肺癌中被广泛接受。血清cea对非小细胞肺癌的诊断特异性可能超过90％，但其敏感性相对较低，导致漏诊和治疗延迟。因此，需要非侵入性和敏感的生物标志物来早期检测非小细胞肺癌。
2、微小rna(microrna，mirna)是一类内源性、保守的长度约为22个核苷酸的短链非编码rna。迄今为止，已有数千种mirna被鉴定为肿瘤抑制因子或癌基因。它们可以通过与靶基因的30个非翻译区结合，在转录后水平调控大多数人类基因。越来越多的研究表明，mirna在细胞或生物体的增殖、侵袭、转移、分化、凋亡和存活等多种生物学活动中发挥重要作用。mirnas的表达模式显示出对细胞类型、组织和发育阶段的特异性。失调的mirna可以通过其靶基因影响多个信号通路，从而导致人类疾病，如癌症。
3、mirna在血液、尿液和唾液等体液中稳定且大量存在，因此可以通过简单且非侵入性的方法检测。因此，mirnas被认为是癌症诊断中具有前景的生物标志物。mir-135a是mirna家族的常见成员，已有研究显示了其在nsclc中的失调情况。因此，mir-135a在nsclc组织中的表达显著下调，而其恢复表达可降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力。mir-135a可能在非小细胞肺癌中发挥抑癌作用。
4、相关研究表明，与健康个体相比，nsclc患者血清中mir-135a的水平显著降低，并与疾病进展密切相关，血清mir-135a可能是nsclc的潜在生物标志物，血清mir-135a的水平可能与nsclc的抑制、发展和进展有关。因此，血清mir-135a以及血清cea水平联合检测可能有助于nsclc的早期诊断。
技术实现思路
1、本发明提供了一种检测非小细胞肺癌的血清标志物及其检测方法。
2、本发明的技术方案：
3、1、患者样本获取
4、从×××医院获取非小细胞肺癌患者样本20例(未接受任何放疗或化疗)，收集同一医院的其他20名献血者作为健康对照。
5、2、实时定量聚合酶链反应(qrt-pcr)
6、使用mirna分离试剂盒(美国应用生物系统公司,foster city,ca)根据生产商操作方法说明从先前制备的血清样本中提取总rna。使用taqman microrna逆转录试剂盒(应用生物系统)从总rna中反转录合成互补dna第一链。以u6为内参照物。
7、3、酶联免疫吸附试验(elisa)
8、elisa法检测血清cea水平。采用第三代elisa试剂盒(canag,canada)进行检测。按照生产厂家的介绍进行操作，每个样品3次重复检测。
9、4、统计分析
10、所有数据均采用spss18.0软件进行统计分析。
1.一种检测早期非小细胞肺癌的血清标志物mir-135a和cea联合检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肺癌患者仅包括非小细胞肺癌ⅰ期和ⅱ期患者。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1中的可供实验标本，包括但不限于adc和scc患者样本。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求2的检测方法特征在于，检测方法更灵敏，特异性更高，有助于早期非小细胞肺癌早期诊断，改善预后。