一种用于增强PCR抑制物耐受性的组合物、方法与应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种用于增强pcr抑制物耐受性的组合物、方法与应用。

背景技术：

1、1983年mullis等人发明的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，pcr)，以少量的dna分子为模板，可以指数扩增复制出大量靶标；具有高特异性、高灵敏性等优点，其应用已扩展到医学、农业、环境、食品等众多领域。

2、以传统pcr为基础，逐渐衍生出众多应用平台，例如实时荧光定量pcr(qpcr)、一代sanger测序、二代高通量测序、数字pcr等。qpcr在传统pcr基础上，引入荧光物质，将扩增产物转换为荧光信号，可实时检测产物扩增情况，是目前应用最为广泛的核酸检测技术；测序是指分析特定dna片段的碱基序列的排列方式，通常需要依赖于高效的pcr反应；数字pcr是一种对核酸分子的绝对定量技术，通过将pcr反应体系分成众多反应单元(几万至几十万个)，检测各单元信号有无，结合软件分析，实现对初始样本中的靶标进行绝对定量，而无需依赖标准曲线。

3、以上各应用平台，靶标模板的质量高低均是pcr成功的关键。为了实现有效的核酸扩增，靶标模板的浓度与纯度均要满足一定要求。临床样本中通常含多种pcr抑制物，这些抑制物如果随样本核酸进入pcr反应体系，将显著降低扩增酶的工作效率，进而直接影响核酸定量检测的准确性。除了在核酸提取过程中尽可能消除这些抑制物，增强pcr体系对抑制物的耐受性，也是保证pcr准确性的重要手段。

技术实现思路

1、综上所述，亟需研究开发一种增强pcr抑制物耐受性的组合物、方法与应用，以提高核酸检测的应用范围及准确度。

2、本发明一方面涉及一种增强pcr抑制物耐受性的组合物，所述组合物含有海藻糖3-7重量份、精氨酸0.5-1.0重量份、牛血清白蛋白0.5-1.0重量份、聚乙二醇0.005-0.015重量份、甘油3-7重量份和曲拉通x-1000.5-1.5重量份。

3、在本发明的一个优选实施方式中，所述组合物含有海藻糖4-6重量份、精氨酸0.7-0.8重量份、牛血清白蛋白0.7-0.8重量份、聚乙二醇0.008-0.012重量份、甘油4-6重量份和曲拉通x-1000.8-1.2重量份。

4、本发明另一方面涉及上述组合物在增强pcr抑制物耐受性中的应用。

5、本发明另一方面还涉及一种pcr检测方法，其特征在于，在pcr体系中引入上述组合物。

6、在本发明的一个优选实施方式中，所述pcr检测方法为定量或定性检测方法。

7、在本发明的一个优选实施方式中，所述pcr检测方法的检测对象为粪便样本中幽门螺杆菌。

8、本发明的有益效果至少为：通过向pcr体系中引入保护剂，提高pcr体系对样本核酸中抑制物的耐受性，提高pcr检测的应用范围及准确度。

技术特征：

1.一种增强pcr抑制物耐受性的组合物，所述组合物含有海藻糖3-7重量份、精氨酸0.5-1.0重量份、牛血清白蛋白0.5-1.0重量份、聚乙二醇0.005-0.015重量份、甘油3-7重量份和曲拉通x-1000.5-1.5重量份。

2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物含有海藻糖4-6重量份、精氨酸0.7-0.8重量份、牛血清白蛋白0.7-0.8重量份、聚乙二醇0.008-0.012重量份、甘油4-6重量份和曲拉通x-1000.8-1.2重量份。

3.权利要求1或2所述的组合物在增强pcr抑制物耐受性中的应用。

4.一种pcr检测方法，其特征在于，在pcr体系中引入权利要求1或2所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的pcr检测方法，所述pcr检测方法为定量或定性检测方法。

6.根据权利要求4所述的pcr检测方法，所述pcr检测方法的检测对象为粪便样本中幽门螺杆菌。

技术总结
本发明公开了一种增强PCR抑制物耐受性的组合物、方法与应用，所述组合物含有海藻糖3‑7重量份、精氨酸0.5‑1.0重量份、牛血清白蛋白0.5‑1.0重量份、聚乙二醇0.005‑0.015重量份、甘油3‑7重量份和曲拉通X‑1000.5‑1.5重量份。本发明通过向PCR体系中引入保护剂，提高PCR体系对样本核酸中抑制物的耐受性，提高PCR检测的应用范围及准确度。

技术研发人员：齐晨,汪艺,李想,吕棠山,李杨霞
受保护的技术使用者：江苏默乐生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5