一种治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物。

背景技术：

1、转化生长因子(tgf)β主要来源于巨噬细胞、上皮细胞和成纤维细胞，是一组多功能的调节细胞生长和分化的细胞因子，包括结构和功能相似的3个成员:tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3。tgfβ最早由delarco和todoro从鼠肉瘤病毒转化的3t3细胞无血清培养液中分离得到，实际是一组诱导非瘤细胞表达转化表型的多肽类物质，其结构是由两个相同或相近的、分子量为12.5kda亚单位由二硫键连接的同源或异源二聚体碱性蛋白。

2、恶性肿瘤发生过程中，会出现生长因子和细胞因子表达异常，其与肿瘤的发生和预后关系密切。体外试验表明这tgfβ能够通过抑制cyclin-依赖性激酶诱导正常细胞和一些恶性转化的上皮细胞发生细胞生长周期停滞。tgfβ还可以通过失活突变、其相应受体的下调或tgfβ信号转导通路的元件突变起到生长抑制效应。肿瘤发展至晚期tgfβ会呈现出促进肿瘤恶化的趋势。

3、纤维化疾病是以大量的成纤维细胞聚集、细胞外基质(ecg)沉积并伴有炎症和损伤所致组织结构破坏为特征的疾病。肺纤维化疾病包括特发性肺纤维化(ipf)、结节病、尘肺、过敏性肺炎、药物和放射线导致的纤维化，以及与胶原血管病有关的致纤维化肺泡炎等病因各异，范围广泛的疾病谱。其发病率和死亡率各不相同，严重性各异，但共同特点是缺少特异性治疗。目前对肺纤维化疾病的治疗仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等，疗效尚不理想。研究发现，tgfβ基因表达和蛋白质产物在各种由博莱霉素、硅、石棉、放射线引起的肺纤维化的动物模型中增加。同样，在人的肺纤维化疾病中，tgfβ1mrna和蛋白质表达也增加。当tgfβ蛋白在肺内过度表达时，能直接导致、诱导肌成纤维细胞的纤维化。研究还发现，抗tgfβ抗体能与tgfβ结合，阻碍tgfβ与其靶细胞表面的各型tgfβr结合而发挥其有效的抗纤维化作用。

4、因此，开发能够抑制tgfβ与其受体结合的药物对晚期肿瘤和纤维化疾病治疗具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种抗tgfβ的人源化纳米抗体，以及该抗tgfβ的人源化纳米抗体在制备治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物中的用途。

2、本发明提供了一种核苷酸分子，它的核苷酸序列如seq id no:9所示。

3、本发明还提供了一种表达载体，它包含核苷酸序列如seq id no:9所示的核苷酸分子。

4、本发明还提供了一种宿主细胞，它包含上述的表达载体。

5、本发明还提供了一种人源化纳米抗体，它包括互补决定区cdr1-cdr3，cdr1的氨基酸序列为ftfsgya，cdr2的氨基酸序列为itpiaht，cdr3的氨基酸序列为adlhrmyty。

6、进一步地，所述人源化纳米抗体还包括与互补决定区cdr1-cdr3交替连接的四个框架区fr1-fr4，fr1的氨基酸序列为qvqlvesggglvqpggslrlscaasg，fr2的氨基酸序列为lgwfrqapgqereavaa，fr3的氨基酸序列为yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyyc，fr4的氨基酸序列为wgqgtlvtvss。

7、进一步地，所述人源化纳米抗体的氨基酸序列为：

8、qvqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsgyalgwfrqapgqereavaaitpiahtyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycadlhrmytywgqgtlvtvss。

9、本发明还提供了一种制备上述人源化纳米抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

10、(1)将核苷酸序列如seq id no:9所示的核苷酸分子连接至表达载体中获得阳性质粒；

11、(2)将阳性质粒转化宿主细胞，诱导表达人源化纳米抗体。

12、本发明还提供了一种药物，它是以上述人源化纳米抗体为活性成分，加上要学上可接受的辅料制备而成的制剂。

13、本发明还提供了上述人源化纳米抗体在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。

14、进一步地，所述纤维化疾病为肺纤维化。

15、本领域技术人员公知的，肿瘤发展至晚期tgfβ会呈现出促进肿瘤恶化的趋势。抗tgfβ抗体可以治疗的晚期肿瘤包括：胃癌、胶质瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胆管癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌等。

16、本发明还提供了上述人源化纳米抗体在制备治疗晚期肿瘤的药物中的用途。

17、进一步地，所述肿瘤为胃癌、胶质瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胆管癌、头颈部鳞状细胞癌或子宫颈癌。

18、本发明的抗tgfβ人源化纳米抗体在保持与tgfβ亲和力的同时能阻断tgfβ与其受体的结合，在制备治疗治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物中具有广阔的应用前景。

19、本发明的抗tgfβ人源化纳米抗体分子量约15kda，这种抗体是人源化抗体，其最大程度的降低了异源性带来的免疫风险，更有利于穿透血脑屏障，更易到达肿瘤内部发挥治疗效果。

20、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

21、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种核苷酸分子，其特征在于，它的核苷酸序列如seq id no:9所示。

2.一种表达载体，其特征在于，它包含权利要求1所述的核苷酸分子。

3.一种宿主细胞，其特征在于，它包含权利要求2所述的表达载体。

4.一种人源化纳米抗体，其特征在于，它包括互补决定区cdr1-cdr3，cdr1的氨基酸序列为ftfsgya，cdr2的氨基酸序列为itpiaht，cdr3的氨基酸序列为adlhrmyty。

5.根据权利要求4所述的人源化纳米抗体，其特征在于，它还包括与互补决定区cdr1-cdr3交替连接的四个框架区fr1-fr4，fr1的氨基酸序列为qvqlvesggglvqpggslrlscaasg，fr2的氨基酸序列为lgwfrqapgqereavaa，fr3的氨基酸序列为yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyyc，fr4的氨基酸序列为wgqgtlvtvss。

6.根据权利要求5所述的人源化纳米抗体，其特征在于，它的氨基酸序列为：

7.一种制备权利要求4-6任一项所述人源化纳米抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

8.一种药物，其特征在于，它是以权利要求4-6任一项所述人源化纳米抗体为活性成分，加上要学上可接受的辅料制备而成的制剂。

9.权利要求4-6任一项所述人源化纳米抗体在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途；优选地，所述纤维化疾病为肺纤维化。

10.权利要求4-6任一项所述人源化纳米抗体在制备治疗晚期肿瘤的药物中的用途；优选地，所述肿瘤为胃癌、胶质瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胆管癌、头颈部鳞状细胞癌或子宫颈癌。

技术总结
本发明提供了一种治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物，属于生物医药领域。该药物是以本发明的人源化纳米抗体为活性成分，加上要学上可接受的辅料制备而成的制剂。该人源化纳米抗体在保持与TGFβ亲和力的同时能阻断TGFβ与其受体的结合，并且最大程度的降低了异源性带来的免疫风险，更有利于穿透血脑屏障，更易到达肿瘤内部发挥治疗效果，在制备治疗晚期肿瘤和纤维化疾病的药物中具有广阔的应用前景。

技术研发人员：余鼎,钟沅沅,付道兴,刘东,李伟,肖宇,杨冉然
受保护的技术使用者：成都蓉生药业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1