一种非天然抗人CD45RA鼠源性嵌合抗原受体的制备及用途

文档序号:36427728发布日期:2023-12-20 23:26阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种非天然抗人cd45ra鼠源性嵌合抗原受体的制备方法,其特征在于,通过t细胞表达car蛋白,特异性地结合人cd45ra抗原,所述嵌合抗原受体的靶向识别区为人cd45ra抗原靶点,mucd45racar或mu3a4car基因由下列结构构成:cd8a leader为car的前导序列,鼠源性cd45ra单链抗体3a4scfv为靶向识别区,cd8a hinge为铰链区,cd8a的transmembrane为car跨膜区,4-1bb的胞内信号转导区与cd3ζ的胞内信号转导区串联为完整的鼠源性cd45racar基因即mucd45racar或mu3a4car基因,鼠源性3a4scfv重链基因核苷酸序列如seqid no 3所示,其氨基酸序列如seq id no 4所示,3a4scfv轻链基因核苷酸序列如seq idno 5所示,其氨基酸序列如seq id no 6所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,具体通过以下步骤实现:

3.两种表达载体,其特征在于,所述载体包含cd8aleader-cd45scf-cd8ahinge-cd8a跨膜区-cd137-cd3ζ或cd8aleader-3a4scfv-cd8a hinge-cd8a跨膜区-cd137-cd3ζ,所述的载体是真核表达载体pcdna3.1(+)-mucd45racar或pcdna3.1(+)-mu3a4car基因和慢病毒载体plenti-mucd45racar或plenti-mu3a4car基因。

4.一种效应细胞,其特征在于,所述的宿主细胞经由权利要求3所述的表达载体转染而来的人t细胞即mucd45racar-t细胞或mu3a4car-t细胞。

5.权利要求1制备的一种非天然抗人cd45ra鼠源性嵌合抗原受体在制备治疗由表达cd45ra的细胞介导引起的疾病的药物中的应用,其特征在于,所述疾病是指表达cd45ra膜抗原的肿瘤性疾病,主要为恶性血液病,具体为急性髓系白血病,急性淋巴细胞白血病,恶性淋巴瘤;慢性髓系白血病和慢性淋巴细胞白血病。


技术总结
本发明提供一种非天然抗人CD45RA鼠源性嵌合抗原受体的制备方法,以鼠源性3A4抗体为基础,采用分子生物学技术进行构建真核表达载体pcDNA3.1/Mu3A4‑4‑1‑BB‑3z、pcDNA3.1/Mu3A4‑4‑1BB‑3ζ‑EGFP和慢病毒表达载体pLenti/Mu3A4‑4‑1BB‑3ζ。慢病毒表达载体pLenti/Mu3A4‑4‑1BB‑3ζ可成功感染人T细胞,有效杀伤3A4阳性靶细胞KG1a细胞、Raji细胞。Mu3A4CAR,识别抗原不依赖于抗原呈递过程,也不受MHC限制性,因而可以克服肿瘤免疫逃逸,更有效地杀伤3A4阳性肿瘤细胞。

技术研发人员:汤永民,张萍
受保护的技术使用者:浙江大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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