一种PEDV高嗜性单克隆细胞株及其应用

本发明属于属于生物免疫，具体涉及一种pedv高嗜性单克隆细胞株及其应用。

背景技术：

1、猪流行性性腹泻病毒(pedv)给全世界的养猪行业造成了严重的经济损失；pedv可以感染各个日龄的猪，猪感染pevd后临床症状以呕吐和腹泻为主，严重情况下容易导致死亡，其中以10日龄内仔猪感染后死亡率最高。截止目前为止，尚未有针对pedv的有效药物，所以对于该病的防控还是以建立良好的生物安全措施和临床检测病原为主。

2、目前对于pedv的疫苗开发有一定的进展，但由于pedv变异毒株的出现，疫苗不能有效保护猪体感染。研发有效的pedv疫苗，对该病的防控具有重要意义。目前各实验室分离、培养pedv的主要细胞系是vero细胞系，但由于pedv在体外细胞培养中面临适应性差、病毒传代不稳定和分离出病毒滴度低等问题，严重阻碍了对猪流行性腹泻的研究以及疫苗等生物制品研发的发展。

3、本研究拟通过细胞克隆基础筛选对pedv易感的vero细胞，并通过系统鉴定筛选到可持续稳定传代和pedv稳定增殖的细胞系，为pedv病原相关研究和疫苗的研究奠定基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种pedv高嗜性单克隆细胞株及其应用。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、一株对pedv病毒易感的细胞株vero-b6，该细胞株vero-b6分类命名为绿猴肾细胞，于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：cgmcc no.45622，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

4、上述的细胞株vero-b6在pedv病原相关研究或疫苗研究中的应用。

5、本发明的有益效果

6、本发明筛选出一株对pedv易感的vero细胞，对筛选出来的vero-b6细胞系的相关特性做系列的鉴定：包括出细胞系形态、细胞稳定性(对pedv增殖稳定性研究和细胞传代稳定性)、外源微生物鉴定等。vero-b6细胞传代到25代，每一代细胞均能贴壁良好，细胞传代稳定，接种pedv后，发现对pedv的易感性也比较稳定，说明细胞特性在传代过程中保持稳定。为了排除外源微生物的污染，本研究利用细菌、真菌的检测方法、支原体检测试剂盒，和rt-pcr方法细菌、真菌、支原体、pedv、prrsv和prov进行了检测，结果显示均为阴性，表明该细胞不含细菌、真菌、支原体及某些外源病毒污染，该细胞系可用于实验室病原和疫苗相关研究。

技术特征：

1.一株对pedv病毒易感的细胞株vero-b6，该细胞株vero-b6于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：cgmcc no.45622，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述的细胞株vero-b6在pedv病原相关研究或疫苗研究中的应用。

技术总结
本发明公开了一种PEDV高嗜性单克隆细胞株及其应用，该细胞株Vero‑B6于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：CGMCC NO.45622。本发明筛选出一株对PEDV易感的Vero细胞，对筛选出来的Vero‑B6细胞系的相关特性做系列的鉴定，结果显示，Vero‑B6细胞传代到25代，每一代细胞均能贴壁良好，细胞传代稳定，接种PEDV后，发现对PEDV的易感性也比较稳定，说明细胞特性在传代过程中保持稳定，且该细胞不含细菌、真菌、支原体及某些外源病毒污染，该细胞系可用于实验室病原和疫苗相关研究。

技术研发人员：王先炜,林喜亿,杨振,姜平
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11