一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法与流程

本发明涉及探针玻片，具体为一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法。

背景技术：

1、传统的羧基修饰玻片或者nhs修饰玻片，受限于玻片表面积、玻片表面电场力影响、玻片表面羧基官能团或者nhs官能团的均匀程度及活化程度，单链dna探针仅仅能较为充分地捕获高表达量的rna分子，对于中低表达量的rna分子不能有效捕获，由此引起rna定量不准确的问题。

技术实现思路

1、本发明所解决的技术问题在于提供一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，以解决技术背景中所提到的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，具体包括以下步骤：

2、(1)、取适合数量的玻片应用edc法进行表面活化；

3、(2)、用适量的ph 5.0100mm mes缓冲液浸泡玻片15min；

4、(3)、取出玻片，用适量的活化缓冲液在室温条件下缓慢震荡30min；

5、(4)、取出玻片，应用清洗液清洗玻片表面3次，用氮气吹干玻片表面；

6、(5)、应用适量体积的的pamam g5树枝状聚合物，在室温条件下缓慢震荡过夜；

7、(6)、取出玻片，应用清洗液清洗玻片3次；

8、(7)、取出玻片，用氮气吹干玻片表面，应用适量双性接枝缓冲液浸泡玻片，在室温条件下缓慢震荡1h；

9、(8)、取出玻片，用氮气吹干玻片表面，随后用适量连接缓冲液在22℃充分震荡过夜；

10、(9)、取出玻片，应用清洗液清洗玻片3次，用氮气吹干玻片表面；

11、(10)、将上述玻片与固体干燥剂一起长期存在于抽真空后的密闭容器中。

12、优选地，所述(3)中活化缓冲液包含以下成分：ph 5.0100mm mes缓冲液和0.1g/mledc。

13、优选地，所述清洗液为：ph 7.4pbs+0.05％tween-20。

14、优选地，所述(7)中双性接枝缓冲液为10mm双琥珀酰亚胺辛二酸酯。

15、优选地，所述(8)中连接缓冲液包含以下成分：ph 5.0100mm mes缓冲液以及100mm具有rna捕获能力的dna探针。

16、与现有技术相比，本方法通过在较稳平缓的条件下，仅仅需要室温及缓慢震荡，应用成本较为低廉的化合物即可在传统的传统羧基修饰玻片或者nhs修饰玻片表面连接上pamam g5树枝状分级聚合物结构，再通过具有双性双琥珀酰亚胺辛二酸酯作为接头(短杆状结构，两端均具有nhs官能团，可以高效结合氨基官能团)，最终可以实现；玻片表面每一个羧基官能团或者nhs官能团，结合一个具有64个氨基官能团的树枝状聚合物结构，而此聚合物的每一个氨基官能团又通过短杆状的双性双琥珀酰亚胺辛二酸酯接头实现64个氨基官能团的结合能力，实现玻片对于氨基修饰dna探针的大规模偶联，提高玻片对于不同表达量程度rna的整体捕获能力，显著提高组织切片内rna分子的原位检测效果。

技术特征：

1.一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，其特征在于，所述(3)中活化缓冲液包含以下成分：ph 5.0100mm mes缓冲液和0.1g/ml edc。

3.根据权利要求1所述的一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，其特征在于，所述清洗液为：ph 7.4pbs+0.05％tween-20。

4.根据权利要求1所述的一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，其特征在于，所述(7)中双性接枝缓冲液为10mm双琥珀酰亚胺辛二酸酯。

5.根据权利要求1所述的一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，其特征在于，所述(8)中连接缓冲液包含以下成分：ph 5.0100mm mes缓冲液以及100mm具有rna捕获能力的dna探针。

技术总结
本发明提供了一种用于组织原位核酸捕获的高密度探针玻片制备方法，具体包括以下步骤：取适合数量的玻片进行表面活化；用适量的缓冲液浸泡玻片；取出玻片，用活化缓冲液缓慢震荡；应用清洗液清洗玻片表面，用氮气吹干玻片表面；应用树枝状聚合物，在室温条件下缓慢震荡过夜；取出玻片，清洗液清洗玻片，用氮气吹干玻片表面，应用适量双性接枝缓冲液浸泡玻片；取出玻片，用氮气吹干玻片表面，随后用适量连接缓冲液震荡过夜；取出玻片，应用清洗液清洗玻片，用氮气吹干玻片表面。本方法制备的玻片实现玻片对于氨基修饰DNA探针的大规模偶联，提高玻片对于不同表达量程度RNA的整体捕获能力，显著提高组织切片内RNA分子的原位检测效果。

技术研发人员：陈岱,王超,张博
受保护的技术使用者：上海烈冰生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8