山胡椒根中分离的倍半萜类化合物及其抗炎应用

本发明涉及医药，更具体地，涉及山胡椒根中分离的倍半萜类化合物及其抗炎应用。

背景技术：

1、山胡椒具有悠久的入药历史，《新修本草》记载山胡椒“味辛、大热、无毒”，“主心腹痛，中冷，破滞”；具有祛风通络、理气活血的功效，在民间常被用来治疗类风湿性关节炎、心腹痛、跌打损伤等。山胡椒根部提取物中含有很多活性成分，如山胡椒素、山胡椒酸、生物碱等，具有抗肿瘤、镇痛等多种活性作用。如公开号为cn105481770a的中国专利文献公开了一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法，该方法包括以下步骤：原料处理；酸性醇水溶液渗漉提取；山胡椒根总生物碱提取物浓缩液的制备；洗脱液的制备；化合物的制备及纯化。该发明采用低浓度醇-酸性醇水溶液作为提取溶剂，反复回收利用提取，能显著提高提取效率，提取得到的生物碱对抗肿瘤新药的开发具有重要的意义。

2、萜类化合物按其化学结构可分为单萜类、倍半萜类、二萜类、酯萜类、三萜类和多萜类等。萜类化合物作为数量最多、种类最多的天然产物之一，因其抗癌、抗氧化、抗病毒和抗炎等重要的生物活性而受到近年来的广泛关注。其中倍半萜类是萜类化合物中分布最多的一类，其药理活性非常丰富，在制药领域具有较好的应用前景。公开号为cn116621854a的中国专利文献公开了臭椿叶中萜类化合物及其制备方法，该发明从苦木科臭椿属植物臭椿叶(ailanthus altissima)中提取分离得到4个萜类化合物，相应的萜类化合物具有良好的抗肝癌活性。

3、炎症反应是一种复杂的生物反应，一般与炎症因子、炎症介质、炎症小体和相关靶点相关。其中，炎症介质在炎症通路中起关键作用。但炎症介质的过度表达会导致免疫系统紊乱，诱发炎症疾病。此外，最新研究表明，创伤和感染引起的急性炎症会转化为慢性炎症。长期的炎症反应会伤及肝、肾、心、肠、脑和其他器官。与炎症相关的常见疾病包括：心血管疾病、关节炎、阿尔茨海默病、糖尿病、肠胃炎、自身免疫性疾病等。总之，炎症反应需要精确和有针对性的调节。非甾体抗炎药是应用最广泛的解热镇痛药物之一，其抗炎机制主要是通过抑制环氧合酶减少炎症介质的产生，然而，该类药物副作用明显，新兴的生物制剂价格又非常昂贵。因此需要开发成本较低、副作用更小的抗炎药物。

技术实现思路

1、本发明提供了山胡椒根中分离的倍半萜类化合物，分离方法简便可靠，效率高，可操作性强，分离得到的倍半萜类化合物具有抗炎活性。

2、具体采用的技术方案如下：

3、山胡椒根中分离的倍半萜类化合物，选自下式所示的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4中的任一种：

4、

5、具体的，所述的山胡椒为樟科山胡椒属植物山胡椒(lindera glauca(siebold&zucc.)blume))。

6、本发明还提供了所述的倍半萜类化合物的分离方法，具体包括以下步骤：

7、(1)取山胡椒的干燥根以乙醇提取，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏采用石油醚萃取，将萃取所得组分经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，共收集得到7个馏分fr.1-fr.7；

8、(2)馏份fr.4经正相硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，得21个馏份fr.4.1-fr.4.21；

9、(3)馏份fr.4.8通过一次半制备高效液相法纯化，得到化合物4；

10、(4)馏份fr.4.12经反相硅胶柱，以甲醇-水系统进行梯度洗脱，得到45个馏分fr.4.12.1-fr.4.12.45；

11、(5)馏份fr.4.12.7通过一次半制备高效液相法纯化，得到化合物2；

12、(6)馏份fr.4.12.8通过两次半制备高效液相法纯化，得到化合物3；

13、(7)馏份fr.4.12.9通过一次半制备高效液相法纯化，得到化合物1。

14、优选的，步骤(1)中，使用的乙醇为浓度80-95％的工业乙醇，乙醇提取方法为热浸渍法，提取温度50-60℃，提取6-7次，每次20-24小时。

15、进一步优选的，使用的乙醇为浓度95％的工业乙醇，提取温度为55℃，提取7次，每次24小时。

16、优选的，步骤(1)中，洗脱时石油醚和乙酸乙酯的体积比例变化为40:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1；步骤(2)中，洗脱时石油醚和乙酸乙酯的体积比例变化为12:1，10:1，8:1，5:1，3:1，0:1；步骤(4)中，洗脱时甲醇和水的体积比例变化为20:80，40:60，60:40，80:20，100:0。

17、优选的，步骤(3)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为体积比为70:30的乙腈/水，流速为2.0ml/min。

18、优选的，步骤(5)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为体积比为24:76的甲醇/水，流速为2.0ml/min。

19、优选的，步骤(6)中，第一次半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimatexb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为体积比为35:65的乙腈/水，流速为2.0ml/min；第二次半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为体积比为40:60的甲醇/水，流速为2.0ml/min。

20、优选的，步骤(7)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为体积比为36:64的乙腈/水，流速为2.0ml/min。

21、本发明还公开了所述的倍半萜类化合物在制备抗炎药物中的应用。

22、本发明还公开了一种抗炎药物，所述的抗炎药物包括所述的倍半萜类化合物。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

24、(1)本发明中提供的倍半萜类化合物均为立体构型确定的光学纯化合物，在现有技术中还未见报道，具有抗炎活性，特别是化合物1和4是潜在的抗炎药物先导物，具有进一步开发抗炎类药物的前景。

25、(2)本发明分离方法简便可靠，效率高，可操作性强。

技术特征：

1.山胡椒根中分离的倍半萜类化合物，其特征在于，选自下式所示的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4中的任一种：

2.根据权利要求1所述的倍半萜类化合物，其特征在于，所述的山胡椒为樟科山胡椒属植物山胡椒(lindera glauca(siebold&zucc.)blume))。

3.根据权利要求1或2所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，使用的乙醇为浓度为80-95％的工业乙醇，乙醇提取方法为热浸渍法。

5.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(1)中，洗脱时石油醚和乙酸乙酯的体积比例变化为40:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，0:1；步骤(2)中，洗脱时石油醚和乙酸乙酯的体积比例变化为12:1，10:1，8:1，5:1，3:1，0:1；步骤(4)中，洗脱时甲醇和水的体积比例变化为20:80，40:60，60:40，80:20，100:0。

6.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(3)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为乙腈/水。

7.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(5)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为甲醇/水。

8.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(6)中，第一次半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为乙腈/水；第二次半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为甲醇/水。

9.根据权利要求3所述的倍半萜类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(7)中，半制备高效液相法的条件为：选用welch ultimate xb-c18液相色谱柱，等度洗脱分离，流动相为乙腈/水。

10.根据权利要求1或2所述的倍半萜类化合物在制备抗炎药物中的应用。

技术总结
本发明公开了山胡椒根中分离的倍半萜类化合物及其抗炎应用，属于医药技术领域。所述的倍半萜类化合物选自下式所示的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4中的任一种。所述的倍半萜类化合物的分离方法为：取山胡椒的干燥根以乙醇提取，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏采用石油醚萃取，将萃取所得组分经硅胶柱层析、正相柱色谱分离和HPLC纯化，或经硅胶柱层析、正相柱色谱分离、反相柱色谱分离和HPLC纯化得到化合物1‑4。本发明中提供的倍半萜类化合物均为立体构型确定的光学纯化合物，特别是化合物1和4是潜在的抗炎药物先导物，具有进一步开发抗炎类药物的前景。

技术研发人员：秦路平,郭佳琪,李华强,蒙雄裕,潘心远
受保护的技术使用者：浙江中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29