一种抗人IgG蛋白的抗体及其应用的制作方法

本发明属于血液免疫吸附领域，具体来说，涉及一种抗人igg蛋白的抗体及其应用。

背景技术：

1、免疫球蛋白（immunoglobulin，ig）是机体受抗原（如病原体）刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去其作用。免疫球蛋白分为5类，包括免疫球蛋白g（igg）、免疫球蛋白a（iga）、免疫球蛋白m（igm）、免疫球蛋白d（igd）和免疫球蛋白e（ige）。其中igg在人类血清中是最丰富的，占总免疫球蛋白的75%，是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，而且在抗细菌、抗病毒过程中起到重要作用。而igg异常可能会导致多种免疫性疾病，如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等疾病可能是由于igg升高导致。针对疾病的发病机制，目前治疗主要通过单抗药物的免疫疗法进行，但是免疫疗法的使用会受到几个因素的限制，例如，为了达到免疫治疗的效果，需要以高剂量的生物药物重复给药，因此可能会诱发一系列自身免疫介导的副作用(，包括免疫原性，抗药物抗体的诱导，血清病等。

2、igg分为4个亚型，分别是igg1、igg2、igg3和igg4，在整体结构上是相似的，fc（fragment crystallizable）恒定区表现出高度的序列同源性，由一对重链ch2和ch3恒定结构域组成，通过铰链（hinge）结构连接两个可结合抗原的fab（fragment of antigenbinding）可变区，包括vh和ch1（重链）以及vl和cκ/λ（轻链）结构域。igg 4个亚型分别在铰链结构和ch2结构域中存在较大差异，主要是铰链结构的长度，即igg3铰链结构长度是fc片段的二倍，使fab片段在结构上远离fc片段，而igg2/igg4的铰链结构长度较短，使fab片段在结构上靠近fc片段。目前已经上市的单抗药物多为结构域蛋白，亚型包括igg1、igg2和igg4，分别具有不同的机制对疾病进行治疗，其fc片段均可与蛋白a结合，但是这些蛋白在贮存和使用过程中均容易发生降解，造成药品批次差异大以及产生免疫原性等问题。

3、与传统抗体不同，纳米抗体是一个只有重链而没有轻链的单域抗体，只有一个可变结构域和抗原结合，，大小约12～17kd，仅为传统抗体（150kd）的十分之一。而且单域抗体只有一个具有二硫键的结构域，折叠成相对稳定的结构，有研究表明单域抗体在37℃孵育一周后仍保持抗原结合能力，使其在治疗或修饰过程中可以使用更苛刻的化学和物理条件。此外，单域抗体体积小，有利于减少潜在免疫原性表位的数量，同时具有快速的血液清除率和抵抗形成聚集体的能力，只引起较低的免疫原性。单域抗体已经在诊断和治疗等不同的生物技术领域作为工具显示出巨大的潜力。

4、开发一种可以特异性吸附igg的抗体，可以保持足够高的抗原特异性和亲和力，并且高产量表达，对于开发相应的免疫治疗制剂具有非常实际的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种抗人igg蛋白的抗体及其应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一个方面，提供：

4、一种抗人igg蛋白的抗体，由框架区fr1～fr4和抗原结合区cdr1～cdr3组成，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：cdr1：qyamg、cdr2：airrsggstyyadsveg、cdr3：ggrdtygyklpttrvdy。

5、在一些抗体的实例中，其fr1～fr4的氨基酸序列分别为：fr1：qvqlqesggglvqaggslrlscavsgntls、fr2：wfrqapgnerefva、fr3：rftisrdsakntvylqmnslqpedtavyycaa、fr4：wgqgtqvtvss。

6、在一些抗体的实例中，其为单域抗体。

7、在一些抗体的实例中，其制备方法包括：

8、s1) 将抗体对应的核苷酸序列与pet-28a载体连接，酶切位点为ndei和xhoi；

9、s2) 将s1）的连接产物转入bl21（de3）感受态细菌中进行转化；

10、s3) 重组蛋白表达：将pcr和测序鉴定条带序列正确的单克隆菌落接种于含有卡那霉素的lb液体培养基中培养至od600=0.6～0.8，使用iptg诱导，离心收集菌体后，低温破碎并离心收集蛋白上清；

11、s4) 重组蛋白纯化：蛋白上清通过亲和层析柱纯化收集洗脱峰，即得到抗体蛋白。

12、本发明的第二个方面，提供：

13、一种免疫吸附剂，包括固相载体，其特征在于，固相载体表面偶联有本发明第一个方面所述的抗体。

14、在一些免疫吸附剂的实例中，所述固相载体选自琼脂糖、壳聚糖、萄聚糖凝胶、树脂和纤维素微球中的至少一种。

15、本发明的第三个方面，提供：

16、本发明第一个方面所述的抗体在制备igg免疫吸附剂中的应用。

17、在一些应用的实例中，所述igg选自igg1、igg2、igg3和igg4亚型中的至少一种。

18、在一些应用的实例中，igg免疫吸附剂为血液igg免疫吸附剂。

19、本发明的第四个方面，提供：

20、本发明第一个方面所述的抗体在制备治疗和/或预防igg异常所引起的疾病药物中的应用。

21、在一些应用的实例中，所述igg选自igg1、igg2、igg3和igg4亚型中的至少一种。

22、在一些应用的实例中，所述igg异常引起的疾病为自身免疫性相关疾病。

23、在一些应用的实例中，自身免疫性相关疾病包括但不限于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和igg型多发性骨髓瘤等。

24、本发明的第五个方面，提供：

25、本发明第一个方面所述的抗体在制备免疫球蛋白igg纯化剂中的应用。

26、在一些应用的实例中，所述igg选自igg1、igg2、igg3和igg4亚型中的至少一种。

27、本发明的有益效果是：

28、本发明一些实例的抗体，对人igg的吸附性能高，特异性好。

29、本发明一些实例的抗体，对人igg的吸附性能好于蛋白a。

30、本发明一些实例的抗体，可以制备成为igg免疫吸附剂，很好地吸附去除过量的igg，为治疗igg异常引起的疾病提供了新的方向。

技术特征：

1.一种抗人igg蛋白的抗体，由框架区fr1～fr4和抗原结合区cdr1～cdr3组成，其特征在于，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：cdr1：qyamg、cdr2：airrsggstyyadsveg、cdr3：ggrdtygyklpttrvdy。

2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，其fr1～fr4的氨基酸序列分别为：fr1：qvqlqesggglvqaggslrlscavsgntls、fr2：wfrqapgnerefva、fr3：rftisrdsakntvylqmnslqpedtavyycaa、fr4：wgqgtqvtvss。

3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，其制备方法包括：

4.一种免疫吸附剂，包括固相载体，其特征在于，固相载体表面偶联有权利要求1～3任一项所述的抗体。

5.根据权利要求4所述的免疫吸附剂，其特征在于，所述固相载体选自琼脂糖、壳聚糖、萄聚糖凝胶、树脂和纤维素微球中的至少一种。

6.权利要求1～3任一项所述的抗体在制备igg免疫吸附剂中的应用。

7.权利要求1～3任一项所述的抗体在制备治疗和/或预防igg异常所引起的疾病药物中的应用。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述igg异常引起的疾病为自身免疫性相关疾病。

9.权利要求1～3任一项所述的抗体在制备免疫球蛋白igg纯化剂中的应用。

10.根据权利要求6、7或9所述的应用，其特征在于，所述igg选自igg1、igg2、igg3和igg4亚型中的至少一种。

技术总结
本发明公开了一种抗人IgG蛋白的抗体及其应用。本发明一些实例的抗体，对人IgG的吸附性能高，特异性好。本发明一些实例的抗体，对人IgG的吸附性能好于蛋白A。本发明一些实例的抗体，可以制备成为IgG免疫吸附剂，很好地吸附去除过量的IgG，为治疗IgG异常引起的疾病提供了新的方向。

技术研发人员：虢雅洁,杨正根,张海珍,庞志倡,黄伟军,陈校园
受保护的技术使用者：广州康盛生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/6