一种蝉花多肽提取物及制备方法、质量检测方法和用途

本发明涉及一种蝉花多肽提取物及制备方法、质量检测方法和用途。

背景技术：

1、生物活性肽具有多种生理调节活性，如降血压、降血脂、抑菌、抗氧化、抑制肿瘤和免疫调节等。抗氧化活性可通过清除人体内自由基，降低自由基过量堆积带来的机体加速衰老、心血管疾病等风险，而抗氧化剂来源主要包括化学抗氧化剂和天然抗氧化剂等。化学抗氧化剂工艺成熟、产量大，但存在一定毒副作用，人体摄入存在很多条件限制。抗氧化肽作为一种天然抗氧化剂，安全性远高于化学抗氧化剂。

2、目前制备多肽方法有酶法、化学法和固态发酵法。化学合成法则对技术要求高，工艺繁琐，多不被采用。酶解法在食品和生物医药业中应用性很高，因为酶解的过程中不会加入有机溶剂，也不会产生对人体有毒害的物质，整个反应体系便于调控，具有多种优点如反应效率高、条件温和、反应过程可控且能够保留多肽的营养价值。目前常见的酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。

3、蝉花为麦角菌科真菌大蝉草cordyceps cicadae shing的无性型蝉拟青霉paecilomyces cicadae(miq.)samon寄生在山蝉cicada ftammatas dist.幼虫上的真菌孢梗束或子座及幼虫尸体的干燥复合体。始载于《雷公炮炙论》，其性寒，味咸、甘，具有疏散风热，透疹，熄风止痉，明目退翳。用于外感风寒，发热头昏，咽痛；麻疹初期，疹出不畅；小儿惊风，夜啼；目赤肿痛，翳膜遮睛。现代研究表明，蝉花中含有核苷类、麦角甾醇、虫草酸、氨基酸、多糖、有机酸等多种化学成分，具有抗氧化、免疫调节、抗衰老、保护肾脏及抗肿瘤等作用。

4、目前对蝉花的研究主要集中在其中的多糖、虫草酸、虫草素领域，如申请号201410799979.3，发明名称：一种提高免疫力、抗肿瘤、改善肾功能、促进睡眠的金蝉花提取物，涉及提高免疫力、抗肿瘤、改善肾功能、促进睡眠的金蝉花提取物，有效解决金蝉花提取物有效成分含量低、活性成分提取得率低、产品收率低及产品活性低的问题，该提取物是金蝉花药材粉碎，加纯水，循环超声提取，离心过滤除渣，得提取液，提取液经超滤膜微滤，得清液，膜浓缩至比重为1.15-1.20的浓缩液，冷冻，干燥，即得，本发明实现了虫草素、虫草酸(甘露醇)、腺苷、多糖等有效成分在较低的温度下的提取，提取得率高，产品收率高。对于蝉花中的多肽，尚无相关的研究报道。

技术实现思路

1、本发明的技术方案是提供了一种蝉花多肽提取物。本发明还提供了该蝉花多肽提取物的制备方法、以及质量检测方法和用途。

2、本发明提供了一种蝉花多肽提取物，它包含下述三个肽段：ivinhpgqigngy、siepptrptdkpl、ftdypplgrf。

3、本发明蝉花多肽提取物是以蝉花为原料，采用水酶法提取制备而成。

4、本发明还提供了一种制备所述的蝉花多肽提取物的方法，它包括如下步骤：

5、a、取蝉花粉末，打粉，加入有机溶剂脱脂；

6、b、取a步骤蝉花脱脂粉，加水于常温下溶胀，用碱或盐调ph，加入蛋白酶水解，水解完成后将溶液煮沸，灭活蛋白酶，冷却、离心，微孔滤膜过滤，浓缩，冷冻干燥，即得。

7、进一步地，a步骤所述的有机溶剂是石油醚；b步骤所述的蛋白酶是瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。

8、更进一步优选地，a步骤所述的脱脂方法为：取蝉花粉末，以1:3(w:v)加入石油醚(30℃～60℃)，于常温静置24h，过滤，滤渣于45℃烘干，得到蝉花脱脂粉末；b步骤所述的提取方法为：取蝉花脱脂粉，加入蒸馏水(料液比1:16)，于常温下0.5h使其充分溶胀，用1mol/lnaoh或1mol/lhcl，调节ph至1.5，加入胃蛋白酶，加酶量为4570u/g，酶解温度为37℃，开始酶解，酶解时间为4h，酶解完成后将样品溶液煮沸10min，使酶灭活，冷却后，4000r/min离心15min，取上清液，待测。

9、本发明还提供了一种所述的蝉花多肽提取物的质量检测方法，它是通过nano lc-q-exactivetm对蝉花中的多肽进行鉴定。

10、进一步地，它包括如下步骤：

11、a、检测样本前处理：

12、取待检测多肽溶液加入dtt溶液使其终浓度为10mmol/l，于56℃水浴中还原1h；加入iam溶液使其终浓度为55mmol/l，避光反应40min；使用自填脱盐柱脱盐，于45℃真空离心浓缩仪中挥干溶剂，0.1％甲酸-水复溶；

13、b、nano lc-ms/ms分析

14、流动相a：0.1％甲酸水；流动相b：20％0.1％甲酸乙腈；流速为600nl/min；上样量2～20μl；洗脱梯度为：0～3min，4％～8％ b；3～89min，8％～28％ b；89～109min，28％～40％ b；

15、质谱检测条件：q-exactivetm hybrid电喷雾-组合型离子阱orbitrap质谱仪，纳米电喷雾电离，正离子模式，串联质谱分析(ms/ms)；在ms和ms2自动切换采集；一级质谱分辨率为：70000，扫描范围100～1500m/z；一级质谱中选取20个最强的离子并通过碰撞诱导解离，二级质谱的分辨率为17500。

16、本发明还提供了所述的蝉花多肽提取物在制备具有抗氧化作用的保健食品或药品中的用途。

17、本发明还提供了一种具有抗氧化作用的保健食品组合物或药物组合物，它含有所述的蝉花多肽提取物为活性成分，加上保健食品或药品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。

18、其中，所述的制剂是口服制剂。

19、本发明蝉花多肽提取物，质量可控，基于质谱检测技术的多肽组学的发展为鉴定蝉花的多肽提供便利。全扫描的数据采集模式。可以获得未知多肽质谱信息，通过对多肽一、二级质谱图进行采集，得到丰富的离子信息，结合数据库匹配完成多肽的分析鉴定。本发明采用多肽组学手段通过纳升液相与高分辨质谱串联(nano lc-q-exactive)技术对蝉花中的多肽类成分进行检测，从而灵敏快速地鉴定多肽短时间内获得大量数据。制备的多肽提取物具有较好的抗氧化性，可以作为优质抗氧化肽的良好来源。

技术特征：

1.一种蝉花多肽提取物，其特征在于：它包含下述三个肽段：ivinhpgqigngy、siepptrptdkpl、ftdypplgrf。

2.根据权利要求1所述的蝉花多肽提取物，其特征在于：它是以蝉花为原料，采用水酶法提取制备而成。

3.一种制备权利要求1或2所述的蝉花多肽提取物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的蝉花多肽提取物的制备方法，其特征在于：

5.根据权利要求4所述的蝉花多肽提取物的制备方法，其特征在于：

6.一种权利要求1或2所述的蝉花多肽提取物的质量检测方法，其特征在于：它是通过nano lc-q-exactivetm对蝉花中的多肽进行鉴定。

7.根据权利要求6所述的蝉花多肽提取物的质量检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：

8.权利要求1或2所述的蝉花多肽提取物在制备具有抗氧化作用的保健食品或药品中的用途。

9.一种具有抗氧化作用的保健食品组合物或药物组合物，其特征在于：它含有权利要求1或2所述的蝉花多肽提取物为活性成分，加上保健食品或药品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。

10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。

技术总结
本发明提供了一种蝉花多肽提取物，它包含下述三个肽段：IVINHPGQIGNGY、SIEPPTRPTDKPL、FTDYPPLGRF。本发明还提供了该多肽提取物的制备方法、质量检测方法及用途。本发明采用多肽组学手段通过纳升液相与高分辨质谱串联(Nano LC‑Q‑Exactive)技术对蝉花中的多肽类成分进行检测，从而灵敏快速地鉴定多肽短时间内获得大量数据。制备的多肽提取物具有较好的抗氧化性，可以作为优质抗氧化肽的良好来源。

技术研发人员：陈志敏,胡昌江,曹马怡洁
受保护的技术使用者：成都中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19