一种Claudin18.2纳米抗体的制备方法及其应用与流程

本发明涉及纳米抗体制备，具体为一种claudin18.2纳米抗体的制备方法及其应用。

背景技术：

1、claudin18.2(cldn18.2)是claudin蛋白质家族的一员，位于细胞膜表面，正常情况下仅低水平表达于胃粘膜分化上皮细胞，但在病理状态下，claudin18.2在多种肿瘤中有的表达显著上调，包括80％的胃肠道腺瘤、60％的胰腺肿瘤。此外，cldn 18.2活化还可见于食管癌、卵巢癌和肺腺癌中，因此是具有潜力治疗癌症的热门靶点。

2、靶向claudin 18.2靶点的药品类型涉及单克隆抗体、双特异性抗体、car-t以及adc，几乎包含了当下主要的生物创新药形式，尤以单克隆抗体在研数量最多。以claudin18.2为靶点制备特异性抗体以及car-t/nk细胞疗法是当前研究的热点。因此，亟需一种可以快速筛选、快速产出高亲和力的claudin18.2抗体的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种claudin18.2纳米抗体的制备方法及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

3、一种claudin18.2纳米抗体，所述claudin18.2纳米抗体为2f、10b、11c、12b中的任意一种，其中：

4、2f的氨基酸序列如seq id no.1所示；

5、10b的氨基酸序列如seq id no.2所示；

6、11c的氨基酸序列如seq id no.3所示；

7、12b的氨基酸序列如seq id no.4所示。

8、前述的一种claudin18.2纳米抗体，

9、2f的dna序列如seq id no.5所示；

10、10b的dna序列如seq id no.6所示；

11、11c的dna序列如seq id no.7所示；

12、12b的dna序列如seq id no.8所示。

13、前述的任意一种claudin18.2纳米抗体的抗原结合部分。

14、一种表达载体，其表达包含前述任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体，所述表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、dna载体，rna载体、质粒中的任一种。

15、一种宿主细胞，其包含前述的表达载体。

16、一种药物组合物，包括前述任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体、表达载体或宿主细胞，以及至少一种药学上可接受的载体。

17、一种car-nk细胞，包括前述任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体作为抗原结合区的car表达载体。

18、优选的，所述的car表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、dna载体，rna载体、质粒中的任一种。

19、优选的，前述的药物组合物或car-nk细胞在制备用于诊断claudin18.2相关疾病的试剂盒中的用途，所述疾病为claudin18.2表达相关的肿瘤、慢性炎性疾病、免疫疾病和感染性疾病。

20、优选的，前述的药物组合物或car-nk细胞在制备恶性肿瘤药物中的应用，所述恶性肿瘤为表达claudin18.2的消化道恶性肿瘤。

21、与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明基于claudin18.2靶点在胃癌、胰腺癌、食管癌等多种癌种中异常表达这一客观事实，将其作为癌症临床治疗的新靶点。本发明先利用双峰驼制备claudin18.2纳米抗体，筛选的高亲和力纳米抗体在分子量上比全长抗体小了很多，能够有效阻断识别和结合肿瘤细胞膜表面的claudin18.2，在预防或治疗肿瘤或/和癌症的药物领域具有价值，尤其在car-t/nk细胞疗法的应用中具有优势。

技术特征：

1.一种claudin18.2纳米抗体，其特征在于，所述claudin18.2纳米抗体为2f、10b、11c、12b中的任意一种，其中：

2.根据权利要求1所述的一种claudin18.2纳米抗体，其特征在于：

3.如权利要求1～2中任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体的抗原结合部分。

4.一种表达载体，其表达包含权利要求1～2中任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、dna载体，rna载体、质粒中的任一种。

5.一种宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求4所述的表达载体。

6.一种药物组合物，其特征在于：包括权利要求1～2中任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体或权利要求4所述的表达载体、或权利要求5所述的宿主细胞，以及至少一种药学上可接受的载体。

7.一种car-nk细胞，其特征在于，包括权利要求1～2中任意一项所述的一种claudin18.2纳米抗体作为抗原结合区的car表达载体。

8.根据权利要求7所述的一种car-nk细胞，其特征在于，所述的car表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、dna载体，rna载体、质粒中的任一种。

9.权利要求6所述的药物组合物或权利要求7所述的car-nk细胞在制备用于诊断claudin18.2相关疾病的试剂盒中的用途，所述疾病为claudin18.2表达相关的肿瘤、慢性炎性疾病、免疫疾病和感染性疾病。

10.权利要求6所述的药物组合物或权利要求7所述的car-nk细胞在制备恶性肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述恶性肿瘤为表达claudin18.2的消化道恶性肿瘤。

技术总结
本发明涉及纳米抗体制备技术领域，具体为一种Claudin18.2纳米抗体的制备方法及其应用。Claudin18.2靶点与肿瘤的发生密切相关，且在胃癌、胰腺癌等多种消化道癌种中异常表达的情况尤为明显，因此学术界将其作为癌症临床治疗的新靶点。本发明利用双峰驼制备Claudin18.2纳米抗体，并成功筛选出高亲和力，且在分子量上比全长抗体小很多的纳米抗体，能够有效识别和结合肿瘤细胞膜表面的Claudin18.2，在CAR‑T/CAR‑NK细胞疗法上的应用上非常有优势。

技术研发人员：叶倩,胡艳平,陈洁
受保护的技术使用者：杭州荣谷生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19