一种银杏内酯B的提取纯化方法与流程

本发明属于中药提取方法领域，特别涉及一种银杏内酯b的提取纯化方法。

背景技术：

1、我国的银杏叶资源占全世界的70％，从银杏叶中提取的产品银杏叶提取物(gbe)是国内和国际市场上预防和治疗心脑血管类疾病药的首选原料。银杏叶提取物的有效成分主要是黄酮苷类和萜类物质。黄酮苷类占24％，以槲皮素、山奈素、异鼠李素为主；萜类占6％，以银杏内酯(ga、gb、gc)、白果内酯(bb)为主。而gbe中的萜类内酯中的银杏内酯b是迄今发现的最强的血小板活化因子拮抗剂，在临床上治疗血栓、急性胰腺炎和心血管疾病，其疗效优于其他同类药。近年来研究发现，该提取物还可用于转移性癌症的治疗。

2、但银杏内酯类化合物结构复杂，目前很难用化学合成的方法制备，且成本高昂，因此目前银杏内酯b主要是从银杏叶中分离得到。中国专利cn111171043b公开了一种银杏内酯b的提取方法，该方法采用有机溶剂提取、载体条件下有机溶剂分离、加水分层、三个阶段的结晶，得到的银杏内酯b收率达到0.63g/kg，该方法有机溶剂耗量大，收率不高。中国专利cn101392000a公开了一种银杏内酯单体的分离纯化方法，该法以银杏叶提取物为原料，通过多步有机溶剂萃取后经高效液相制备所得，该方法需要大量有机溶剂萃取、高效液相分离和大孔吸附树脂纯化，步骤多，有机溶剂耗量大，成本高，不适合工业化生产。中国专利cn101747338a公开了一种银杏内酯类化合物制备方法，该法以银杏叶或银杏叶提取物为原料，通过水提及有机溶剂萃取后上硅胶柱，分别收集各内酯流份，再进行重结晶，水提的提取率不高，有机溶剂耗量大。中国专利cn101134758a公开了一种制备银杏内酯单体的方法，该方法以银杏叶为原料，通过醇提、乙酸乙酯萃取，萃取物过选择性极性无孔吸附树脂，制得银杏总内酯，总内酯再过硅胶柱后分别收集各内酯流份并重结晶获得各内酯单体，步骤复杂，成本高。目前为止，还没有特别适合工业化生产的工艺简单、操作方便、成本低廉且得到高收率高纯度银杏内酯b的制备工艺。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供步骤简单、成本低、有机溶剂耗量少、且得到高纯度高收率银杏内酯b的提取纯化方法。

2、本发明提供一种银杏内酯b的提取纯化方法，包括：

3、(1)将银杏叶粉碎，加入混合酸溶液，浸泡提取，过滤，得到银杏叶提取液1，其中混合酸溶液为：体积比1:1～3:1的hcl溶液和酒石酸溶液的混合溶液，银杏叶与混合酸溶液的质量比为1:20～40；

4、(2)将步骤(1)中银杏叶提取液1浓缩，加热煮沸，加入滑石粉搅拌至降到室温，继续搅拌过滤，滤液冷藏，过滤，得到提取液2；

5、(3)将步骤(2)中的提取液2加热，加入乙酸乙酯保温搅拌，分层，得到有机相1，加入水再次搅拌，分层，得到有机相2，过滤、旋干，得到粗提物；

6、(4)将步骤(3)中粗提物中加入乙醇溶解，过滤，过酸性氧化铝层析柱，用85～95％的乙醇洗脱，得到洗脱液；

7、(5)将步骤(4)中洗脱液浓缩至含醇量60％-70％，在4-10℃的条件下冷藏，过滤、干燥后得银杏内酯b粗品；

8、(6)将步骤(5)中银杏内酯b粗品加入正庚烷和乙醇的混合溶液中，70-80℃加热搅拌至溶解，静置降温至20～30℃，保温析晶，过滤，干燥，得到银杏内酯b。

9、优选地，所述步骤(1)中浸泡提取温度为90～100℃，浸泡提取时间为3～5h。

10、优选地，所述步骤(1)中hcl溶液的ph为2～3；酒石酸溶液的ph为2～4。

11、优选地，所述步骤(2)中浓缩到相对密度1.05-1.15；加热煮沸时间为20～40分钟。

12、优选地，所述步骤(2)中滑石粉加入前在110～120℃活化0.5～1.5小时，增加吸附力。

13、优选地，所述步骤(2)中滑石粉重量为提取浓缩液重量的0.1～0.2倍。

14、优选地，所述步骤(2)中冷藏温度为0-5℃，冷藏时间为6-12h。

15、优选地，所述步骤(3)中加热至40～50℃，保温搅拌时间为20～30min。

16、优选地，所述步骤(3)中再次搅拌温度为室温，再次搅拌时间为20-30min。

17、优选地，所述步骤(3)中乙酸乙酯重量为提取液2重量的1-2倍；水的体积是乙酸乙酯体积的1-2倍。

18、优选地，所述步骤(5)中冷藏时间为12h以上。

19、优选地，所述步骤(6)中正庚烷和乙醇的混合溶液的重量是银杏内酯b粗品重量的10～12倍。

20、优选地，所述步骤(6)中正庚烷和乙醇的质量比为1:3～1:6。

21、优选地，所述步骤(6)中析晶时间为3-4h。

22、有益效果

23、本发明综合了水蒸气蒸馏法和有机溶剂萃取法的优点，既解决了水蒸气蒸馏法提取率不高和有机溶剂萃取法损耗大量溶剂的问题，又能提高银杏内酯b的收率，同时保证了银杏内酯b的纯度，具备制备工艺简单、易于操作、有机溶剂耗损少、成本低、收率和纯度高的优点，适于工业化生产，具有较大的应用价值。

24、本发明生产成本约70～92元/g(生产成本＝生产总成本除以产物银杏内酯b重量)，有机溶剂耗用量约1.5～2.3l/g(有机溶剂耗用量＝有机溶剂耗用总体积除以产物银杏内酯b重量)，银杏内酯b收率在0.78g/kg(银杏内酯b的收率＝最终产物银杏内酯b产品重量g/银杏叶重量kg)以上，hplc测试纯度大于99％，转移率在39％(银杏内酯b的转移率＝(最终产物银杏内酯b重量/银杏叶中银杏内酯b重量)×100％)以上。

技术特征：

1.一种银杏内酯b的提取纯化方法，包括：

2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)中浸泡提取温度为90～100℃，浸泡提取时间为3～5h。

3.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)中hcl溶液的ph为2～3；酒石酸溶液的ph为2～4。

4.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中浓缩到相对密度1.05-1.15；加热煮沸时间为20～40分钟；滑石粉重量为提取浓缩液重量的0.1～0.2倍。

5.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中冷藏温度为0-5℃，冷藏时间为6-12h。

6.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中加热至40～50℃，保温搅拌时间为20～30min；再次搅拌温度为室温，再次搅拌时间为20-30min。

7.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中乙酸乙酯重量为提取液2重量的1-2倍；水的体积是乙酸乙酯体积的1-2倍。

8.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(5)中冷藏时间为12h以上。

9.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(6)中正庚烷和乙醇的混合溶液的重量是银杏内酯b粗品重量的10～12倍；正庚烷和乙醇的质量比为1:3～1:6。

10.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于，所述步骤(6)中析晶时间为3-4h。

技术总结
本发明涉及一种银杏内酯B的提取纯化方法。该方法包括：(1)将银杏叶粉碎，加入混合酸溶液浸泡提取；(2)将银杏叶提取液1浓缩，煮沸，加入滑石粉，过滤，冷藏，过滤；(3)将提取液2加入乙酸乙酯，分层，加入水，分层，过滤、旋干；(4)将粗提物加入乙醇溶解，过酸性氧化铝层析柱，洗脱；(5)将洗脱液浓缩，冷藏，过滤、干燥；(6)将银杏内酯B粗品加入正庚烷和乙醇的混合溶液，析晶。该方法既解决了水蒸气蒸馏法提取率不高和有机溶剂萃取法损耗大量溶剂的问题，又能提高银杏内酯B的收率，同时保证了银杏内酯B的纯度，具备制备工艺简单、易于操作、有机溶剂耗损少、成本低、收率和纯度高的优点，适于工业化生产。

技术研发人员：李文,母富国,李占洋,王驰航
受保护的技术使用者：四川金瑞基业药物研究有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25