14,15-EET在制备培养体系中的应用

本发明属于卵丘卵母细胞复合体培养的，具体涉及14,15-eet在制备培养体系中的应用。

背景技术：

1、卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,cocs)由卵巢卵泡内的卵丘颗粒细胞及卵母细胞组成，卵丘颗粒细胞(granuloaa cells,gcs)为卵母细胞的发育与成熟提供能量、营养及屏障，gcs是卵母细胞的能量工厂和保护伞。cocs的发育和成熟受不同因素的调节，例如促卵泡生成素、促黄体生成素、雌激素及各种生长因子等，gcs分泌各种生殖激素、细胞因子、抗氧化物，产生atp供应给卵子。gcs发挥良好的内分泌及抗氧化功能是保证卵子发育成熟的关键步骤，当gcs抗氧化能力下降、衰老、凋亡或能量供应不足时，卵子发育成熟受阻，干扰后续成功受精和及正常的胚胎发育。

2、活性氧(reactive oxygen species,ros)在机体内不断的产生，同时也不断被体内一些抗氧化剂清除，从而保持在一个氧化与抗氧化的平衡状态。ros对正常的生理过程有着至关重要的作用，如参与调节细胞的增值、分化，参与细胞的信号传导和能量代谢，参与核苷酸、蛋白质等重要物质的生物合成。有研究报道，辅助生殖过程的体外受精及胚胎培养中的培养液本身也是ros的来源。过量的ros可破坏dna、生物膜、蛋白质等生物大分子，从而破坏基因结构和正常的细胞功能。最新研究发现，cocs中ros过高可通过干扰线粒体代谢、调节细胞周期、诱发脂质过氧化、损伤dna双链、产生有毒炎性介质等多种途径，导致gcs的衰老，降低gcs的atp水平，从而导致卵泡发育异常、卵母细胞成熟障碍，引起不孕。

3、氧化脂质是指多不饱和脂肪酸(花生四烯酸、亚油酸、α-亚麻酸、dha、epa、dgla等)发生自动氧化或者是在特定酶(cox、lox、cyp450)的作用下生成的一系列氧化代谢产物。在机体炎症反应、免疫防御、内分泌调节以及氧化应激等方面发挥着重要作用。环氧二十碳三烯酸eet是花生四烯酸经细胞色素p450加氧酶代谢而成的产物，包括4种区域异构体：5,6-eet、8,9-eet、11,12-eet和14,15-eet。eets具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗纤维化、促进血管新生等作用，eets主要通过可溶性环氧化物水解酶代谢为活性较低的二羟基二十碳三烯酸。在4种eets中，(+/-)14,15-环氧二十碳-5z，8z，11z-三烯酸(14,15-eet)的生物活性最强，功能最广泛，14,15-eet不仅具有强抗氧化能力，还能有效抑制细胞衰老，同时兼具促进血管新生与炎症调节的作用。排卵是cocs从卵巢排出的过程，cocs的正常排出涉及大量血管新生与炎症反应。目前并未有关于14,15-eet与gcs、cocs、卵泡发育、子宫内膜异位症合并不孕症的研究报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供弥补现有技术的不足，将14,15-eet用于卵丘颗粒细胞、卵母细胞或卵丘卵母细胞复合体的培养，减轻卵丘颗粒细胞的衰老，增强卵丘颗粒细胞的抗氧化能力，增加卵丘颗粒细胞的atp生成能力，抑制卵丘颗粒细胞的凋亡，改善卵丘卵母细胞复合体的氧化应激状态，治疗子宫内膜异位症合并不孕症。

2、本发明提供了14,15-eet在制备培养体系中的应用，所述培养体系包括卵丘颗粒细胞培养体系、卵母细胞培养体系或卵丘卵母细胞复合体培养体系。

3、优选的，所述培养体系中14,15-eet的浓度为50-200nm。

4、本发明还提供了一种卵丘颗粒细胞、卵母细胞或卵丘卵母细胞复合体的培养体系，包括基础培养基和14,15-eet。

5、优选的，所述培养体系中14,15-eet的浓度为100nm。

6、优选的，所述基础培养基包括dmem/f12。

7、本发明还提供了14,15-eet或上述技术方案所述的培养体系在制备(a)～(f)中的一种或多种产品中的应用；

8、(a)降低卵丘颗粒细胞的活性氧水平的产品；

9、(b)逆转卵丘颗粒细胞衰老的产品；

10、(c)逆转卵丘颗粒细胞凋亡的产品；

11、(d)逆转卵丘颗粒细胞atp含量降低的产品；

12、(e)体外受精-胚胎移植产品；

13、(f)治疗子宫内膜异位症合并不孕症的产品。

14、优选的，所述卵丘颗粒细胞衰老、凋亡或atp含量降低的诱导因素包括活性氧。

15、有益效果：

16、本发明在卵丘卵母细胞复合体的培养液中添加14,15-eet，通过减轻卵丘颗粒细胞的内质网应激，能够减轻卵丘颗粒细胞的衰老，增强卵丘颗粒细胞的抗氧化能力，增加卵丘颗粒细胞的atp生成能力，抑制卵丘颗粒细胞的凋亡，改善卵丘卵母细胞复合体的氧化应激状态，治疗子宫内膜异位症合并不孕症，提高体外受精-胚胎移植的成功率。

技术特征：

1.14,15-eet在制备培养体系中的应用，其特征在于，所述培养体系包括卵丘颗粒细胞培养体系、卵母细胞培养体系或卵丘卵母细胞复合体培养体系。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述培养体系中14,15-eet的浓度为50-200nm。

3.一种卵丘颗粒细胞、卵母细胞或卵丘卵母细胞复合体的培养体系，其特征在于，包括基础培养基和14,15-eet。

4.根据权利要求3所述的培养体系，其特征在于，所述培养体系中14,15-eet的浓度为50-200nm。

5.根据权利要求3所述的培养体系，其特征在于，所述基础培养基包括dmem/f12。

6.14,15-eet或权利要求3～5任一项所述的培养体系在制备(a)～(f)中的一种或多种产品中的应用；

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述卵丘颗粒细胞衰老、凋亡或atp含量降低的诱导因素包括活性氧。

技术总结
本发明属于卵丘卵母细胞复合体培养的技术领域，具体涉及14,15‑EET在制备培养体系中的应用。本发明在卵丘颗粒细胞培养体系、卵母细胞培养体系或卵丘卵母细胞复合体培养体系中添加14,15‑EET，通过减轻卵丘颗粒细胞的内质网应激，能够减轻卵丘颗粒细胞的衰老，增强卵丘颗粒细胞的抗氧化能力，增加卵丘颗粒细胞的ATP生成能力，抑制卵丘颗粒细胞的凋亡，改善卵丘卵母细胞复合体的氧化应激状态，治疗子宫内膜异位症合并不孕症，提高体外受精‑胚胎移植的成功率。

技术研发人员：林翔,戴永东,张松英
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25