检测FCGR2A、TBC1D5和CDC42BPA的试剂盒

本发明涉及基因检测，具体涉及一种同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒。

背景技术：

1、对于hiv病毒的彻底清除是hiv治疗领域急需攻克的难题。现如今hiv的联合抗逆转录病毒疗法(combined anti-retroviral therapy,cart)尽管能够很好地抑制病毒的繁殖，却无法清除hiv潜伏感染，导致hiv感染无法被彻底治愈。近年来，部分科学家发现cd30、cd32a等分子在hiv潜伏感染的细胞中富集，表明这些分子可能是hiv潜伏库的标志物，同时也可能成为car-t治疗的良好靶点。

2、gp120/cd32a双car-γδt疗法可以同art疗法配合实现hiv的功能性治疗。为了筛选gp120/cd32a双car-γδt疗法的适用范围和进一步探究hiv潜伏感染者中cd32a的表达机制，需要准确筛选出合适的hiv感染者用于后续的gp120/cd32a双car-γδt疗法的研究性临床试验。

技术实现思路

1、为解决背景技术中存在的问题，本发明提供了一种同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，该试剂盒可以快速高效的筛选出适合gp120/cd32a双car-γδr疗法的hiv感染者，也适用于cd32a的表达机制研究。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

3、一种同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，所述试剂盒包括：用于检测fcgr2a的引物对ⅰ和荧光探针ⅰ，用于检测tbc1d5的引物对ⅱ和荧光探针ⅱ，用于检测cdc42bpa的引物对ⅲ和荧光探针ⅲ；

4、所述引物对i具有序列如seq id no:1所示的上游引物ⅰ和seq id no:2所示的下游引物ⅰ，所述荧光探针ⅰ的核苷酸序列如seq id no:3所示；

5、所述引物对ⅱ具有序列如seq id no:4所示的上游引物ⅱ和seq id no:5所示的下游引物ⅱ，所述荧光探针ⅱ的核苷酸序列如seq id no:6所示；

6、所述引物对ⅲ具有序列如seq id no:7所示的上游引物ⅲ和seq id no:8所示的下游引物ⅲ，所述荧光探针ⅲ的核苷酸序列如seq id no:9所示。

7、按上述方案，所述荧光探针ⅰ、荧光探针ⅱ和荧光探针ⅲ的5’端均标记有荧光报告基团，3’端均标记有荧光猝灭基团。

8、按上述方案，荧光探针ⅰ的5’端标记的荧光报告基团为rox，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq2，荧光探针ⅱ的5’端标记的荧光报告基团为hex，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq2，荧光探针ⅲ的5’端标记的荧光报告基团为fam，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq1。

9、按上述方案，所述试剂盒还包括用于扩增内参基因gapdh的引物对ⅳ和荧光探针ⅳ，所述引物对ⅳ具有序列如seq id no:10所示的上游引物ⅳ和seq id no:11所示的下游引物ⅳ，所述荧光探针ⅳ的核苷酸序列如seq id no:12所示。

10、按上述方案，荧光探针ⅳ的5’端标记的荧光报告基团为cy5，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq3。

11、按上述方案，所述试剂盒还包括多重荧光定量pcr检测试剂和/或样本提取试剂。

12、按上述方案，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照包括含有fcgr2a基因的重组质粒、含有cdc42bpa基因的重组质粒、含有tbc1d5基因的重组质粒。

13、按上述方案，所述阳性对照还包括含有gapdh基因的重组质粒。

14、本发明的有益效果是：本发明提供了一种对fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa基因进行特异性检测的多重荧光定量pcr试剂盒，能够同时对fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa基因进行定量检测。该试剂盒的灵敏度和特异性高，检测样本中片段的拷贝数达到10时即可获得有效的荧光信号。

技术特征：

1.一种同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

2.根据权利要求1所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述荧光探针ⅰ、荧光探针ⅱ和荧光探针ⅲ的5’端均标记有荧光报告基团，3’端均标记有荧光猝灭基团。

3.根据权利要求2所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，荧光探针ⅰ的5’端标记的荧光报告基团为rox，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq2，荧光探针ⅱ的5’端标记的荧光报告基团为hex，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq2，荧光探针ⅲ的5’端标记的荧光报告基团为fam，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq1。

4.根据权利要求1所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增内参基因gapdh的引物对ⅳ和荧光探针ⅳ，所述引物对ⅳ具有序列如seq id no:10所示的上游引物ⅳ和seq id no:11所示的下游引物ⅳ，所述荧光探针ⅳ的核苷酸序列如seq id no:12所示。

5.根据权利要求4所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，荧光探针ⅳ的5’端标记的荧光报告基团为cy5，3’端标记的荧光猝灭基团为bhq3。

6.根据权利要求1-5任一项所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，还包括多重荧光定量pcr检测试剂和/或样本提取试剂。

7.根据权利要求1-5任一项所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照，所述阳性对照包括含有fcgr2a基因的重组质粒、含有cdc42bpa基因的重组质粒、含有tbc1d5基因的重组质粒。

8.根据权利要求7所述的同时检测fcgr2a、tbc1d5和cdc42bpa的多重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述阳性对照还包括含有gapdh基因的重组质粒。

技术总结
本发明提供了一种同时检测FCGR2A、TBC1D5和CDC42BPA的多重荧光定量PCR试剂盒，包括：用于检测FCGR2A的引物对I和荧光探针Ⅰ，核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；用于检测TBC1D5的引物对Ⅱ和荧光探针Ⅱ，核苷酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；用于检测CDC42BPA的引物对Ⅲ和荧光探针Ⅲ，核苷酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。试剂盒的灵敏度和特异性高，检测样本中片段的拷贝数达到10时即可获得有效的荧光信号。

技术研发人员：孙健红,王嘉元,许娜,张同存,项诗棋
受保护的技术使用者：武汉科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17