检测目标区域甲基化水平的试剂在制备胎盘疾病诊断产品中的应用

本申请属于分子诊断，具体涉及一种检测目标区域甲基化水平的试剂在制备胎盘疾病诊断产品中的应用。

背景技术：

1、传统技术中通常利用妊娠妇女的外周血胎盘生长因子pigf、可溶性fms样酪氨酸激酶sfit-1及平均动脉压map、子宫动脉多普勒搏动指数utpi等影像学数据预测孕早期子痫前期。该方法利用孕早期检测到的孕妇外周血pigf/sfit-1比值，结合超声影像提供的map和utpi数据，计算孕妇发生子痫前期的概率，目前已经在临床开始使用。

2、传统技术检测胎盘疾病包含胎盘超声影像分析、血清蛋白含量检测、外周血游离dna测序等技术，但对设备、人力和检测试剂均需较高花费，检测成本高，并且过程繁琐，检测效率较低。

技术实现思路

1、基于此，本申请一实施例提供一种检测目标区域甲基化水平的试剂用于制备胎盘疾病诊断产品，有效提升检测效率。

2、本申请一方面提供检测目标区域甲基化水平的试剂在制备胎盘疾病诊断产品中的应用，以grch38.p14为参考，所述目标区域包括区域1~区域4中的一个或多个，其中：

3、区域1包括：chr2：186590101~186590222、

4、区域2包括：chr17：19237412~19237541、

5、区域3包括：chr6：68635080~68635169、

6、区域4包括：chr13：73059404~73059567。

7、在其中一个实施例中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区甲基化水平的检测：

8、甲基化特异性pcr、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字pcr法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和甲基化荧光定量pcr法。

9、本申请另一方面还提供一种诊断胎盘疾病的核酸产品，所述核酸产品包括用于检测目标区域甲基化水平的检测引物对，以grch38.p14为参考，所述目标区域包括区域1~区域4中的一个或多个，其中：

10、区域1包括：chr2：186590101~186590222、

11、区域2包括：chr17：19237412~19237541、

12、区域3包括：chr6：68635080~68635169、

13、区域4包括：chr13：73059404~73059567。

14、在其中一个实施例中，区域1的检测引物对的核苷酸序列如seq id no.7~8所示；及/或，

15、区域2的检测引物对的核苷酸序列如seq id no.9~10所示；及/或，

16、区域3的检测引物对的核苷酸序列如seq id no.11~12所示；及/或，

17、区域4的检测引物对的核苷酸序列如seq id no.13~14所示。

18、在其中一个实施例中，还包括核苷酸序列如seq id no.5~6所示的参考引物对。

19、在其中一个实施例中，检测样本包括细胞样本和组织样本中的一种或两种。

20、在其中一个实施例中，所述组织样本包括血液样本。

21、在其中一个实施例中，所述血液样本包括外周血样本。

22、本申请还提供一种诊断胎盘疾病的试剂盒，所述试剂盒包括所述的核酸产品。

23、在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、甲基化转化试剂、质控试剂、pcr反应试剂和测序试剂中的一种或多种。

24、在其中一个实施例中，所述pcr反应试剂包括dntps、dna聚合酶和mg2+中的一种或多种。

25、在其中一个实施例中，所述甲基化转化试剂包括重亚硫酸盐。

26、相对于传统技术，本申请的有益效果包括：

27、本申请通过研究发现，通过检测区域1：chr2 186590101~186590222，区域2：chr1719237412~19237541；区域3：chr6 68635080~68635169；区域4：chr13 73059404~73059567甲基化水平能够有效反应胎盘相关疾病，并且本申请的检测试剂在检测中单个样本完成实验操作在8小时以内（提取2个小时，甲基化转换3个小时和qmsp2个小时），结合thermoquantstudio 6 flex荧光定量qpcr平台拥有384高通量检测，极大提高了检测的效率。

28、并且，本申请与外周血游离dna测序等技术相比，费用低，可操作性高，对人员和仪器的要求低，与其他血液生物标志物如血清蛋白标志物sflt/plgf相比，本研究采用的检测技术更加简单经济，未来拓展性较大，与超声及mri等影像技术相比，对人员和仪器的要求低，不受仪器和场地限制。

技术特征：

1.检测目标区域甲基化水平的试剂在制备胎盘疾病诊断产品中的应用，其特征在于，以grch38.p14为参考，所述目标区域包括区域1~区域4中的一个或多个，其中：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区甲基化水平的检测：

3.一种诊断胎盘疾病的核酸产品，其特征在于，所述核酸产品包括用于检测目标区域甲基化水平的检测引物对，以grch38.p14为参考，所述目标区域包括区域1~区域4中的一个或多个，其中：

4.根据权利要求3所述的核酸产品，其特征在于，

5.根据权利要求3所述的核酸产品，其特征在于，还包括核苷酸序列如seq id no.5~6所示的参考引物对。

6.根据权利要求3~5任一项所述的核酸产品，其特征在于，检测样本包括细胞样本和组织样本中的一种或两种；

7.一种诊断胎盘疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3~4任一项所述的核酸产品。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、甲基化转化试剂、质控试剂、pcr反应试剂和测序试剂中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述pcr反应试剂包括dntps、dna聚合酶和mg2+中的一种或多种。

10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述甲基化转化试剂包括重亚硫酸盐。

技术总结
本申请属于分子诊断技术领域，具体涉及一种检测目标区域甲基化水平的试剂在制备胎盘疾病诊断产品中的应用。本申请通过研究发现，通过检测区域1：chr2 186590101~186590222，区域2：chr17 19237412~19237541；区域3：chr6 68635080~68635169；区域4：chr13 73059404~73059567甲基化水平能够有效反应胎盘相关疾病，并且本申请的检测试剂在检测中单个样本完成实验操作在8小时以内（提取2个小时，甲基化转换3个小时和qMSP2个小时）。ThermoQuantStudio 6 Flex荧光定量qPCR平台拥有384高通量检测，极大提高了检测的效率。

技术研发人员：余波澜,徐秀廷,陈敦金
受保护的技术使用者：广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/2/21