一种用于结合丝氨酸肽酶抑制剂Kazal1型蛋白的单克隆抗体及其用途

本发明属于生物，涉及一种单克隆抗体，更具体地涉及一种用于结合丝氨酸肽酶抑制剂kazal1型蛋白的单克隆抗体以及其用途。

背景技术：

1、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，hcc，以下简称肝癌)是最主要的原发性肝癌。我国每年新增肝癌患者超过40万例，占全球总数50％以上，肝癌相关死亡率在我国各恶性肿瘤中高居第二位，严重威胁我国人民的生命和健康。由于病情隐匿,绝大部分肝癌患者确诊时已处于中晚期，无法进行手术切除。肝动脉化疗栓塞(transarterialchemoembolization，tace)是临床上不可手术切除的中期肝癌的标准治疗手段，然而实际应用中超过半数患者对tace治疗无响应，即出现“治疗抵抗”。肝癌细胞的化疗药物抗性是tace治疗抵抗的最主要因素。临床观察表明，丝氨酸肽酶抑制剂kazal 1型蛋白(serineprotease inhibitorkazal-type 1,spink1)在多种癌症中高表达导致肿瘤细胞对化疗药物产生抗性，而单克隆抗体已经被广泛应用于治疗癌症等相关疾病，并取得较多成果。目前市面上的商业化spink1单克隆抗体只能应用于抗原检测及生理生化实验，如蛋白质印迹、elisa等，不具备细胞生物学活性功能，所以这些抗体并不具备体内试验及癌症治疗的潜力。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于结合丝氨酸肽酶抑制剂kazal1型蛋白的新型单克隆抗体，简称spink1单克隆抗体，该抗体具备完整生物学活性功能，能抑制肝癌肿瘤细胞的生长，对肝癌防治有一定疗效的效果。

2、本发明所述的spink1单克隆抗体是由保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmcc no.45745的小鼠杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体。该杂交瘤细胞可以稳定、高效地产生高质量的spink1单克隆抗体，可以作为工程菌株进行工业化生产。

3、发明人通过对抗原序列的优化和杂交瘤细胞融合技术，成功筛选到elisa灵敏度达到1～100ng/ml的19株单克隆细胞株，进一步细胞功能筛选实验出6个具有细胞生物学功能的细胞株，其中取功能效果最强的一株(克隆号：50404-1hz/4l22)进行纯化及菌株保藏。

4、本发明所述的spink1单克隆抗体与现有的商业化抗体相比，不但抗原结合灵敏度高，而且能够更有效抑制肝癌肿瘤细胞生长，增加肿瘤细胞在化疗药物作用下的凋亡，能够在肝癌防治中取得一定疗效。

5、本发明的第二个目的在于提供所述的spink1单克隆抗体的用途。

6、本发明所述的spink1单克隆抗体可以用于制备治疗肝癌的药物。

7、本发明所述的spink1单克隆抗体是一种能用于肝癌治疗的具备完整生物学活性的spink1单克隆抗体。该抗体能以ec50<30ng/ml的有效浓度中和肝癌肿瘤细胞分泌的spink1蛋白，从而抑制肝癌肿瘤细胞生长，增加肿瘤细胞在化疗药物作用下的凋亡，且不影响正常肝细胞生长，进而极大的提高了肝癌治疗的成功率。

8、本发明所述的spink1单克隆抗体可用于制备以spink1为目标靶点的抗原检测试剂盒。在蛋白质印迹检测中，本发明所述抗体具备高特异性，在人源组织及细胞等样本检测中，只有表达spink1蛋白的细胞及组织中能检测到特异性条带信号，而不表达该蛋白的组织中，无条带显示(见实施例八数据)。另外与目前商业化的spink1单克隆抗体相比，本发明所述的抗体具有更高灵敏度(ec50效价约为30ng/ml，见实施例四数据)。基于上述特点，本发明所述的spink单抗可用于制备肝癌诊断等相关试剂盒。

技术特征：

1.由保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmccno.45745的小鼠杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体用于制备治疗肝癌的药物中的用途。

3.如权利要求1所述的单克隆抗体用于制备以spink1为目标靶点的抗原检测试剂盒。

4.如权利要求1所述的单克隆抗体用于制备肝癌的诊断试剂盒。

技术总结
本发明涉及一种用于结合丝氨酸肽酶抑制剂Kazal1型蛋白的单克隆抗体以及其用途。本发明所述的SPINK1单克隆抗体是由保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.45745的小鼠杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体。与目前商业化的SPINK1单克隆抗体相比，本发明所述的抗体除了具有更高灵敏度，更重要的是，具备完整生物学活性功能，能抑制肝癌肿瘤细胞的生长，对肝癌防治有一定疗效的效果。因此，本发明所述的SPINK1单克隆抗体不但可用于制备以SPINK1为目标靶点的抗原检测试剂盒，还可以用于肝癌相关治疗的药物制备，如靶向用药及化疗药物联用等。

技术研发人员：周蕾,张昭,文岐方,马桂宜,王明桥
受保护的技术使用者：中山大学附属第一医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4