核酸提取方法与流程

本发明涉及生物，尤其是涉及一种核酸提取方法。

背景技术：

1、核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要，也是最基础的技术。

2、目前核酸的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶柱纯化、磁珠法等，其中磁珠法核酸纯化技术是一种较为常见的核酸的提取方法，利用氧化硅纳米微球的磁性，在外加磁场的作用下，能够与核酸分子特异性地识别和高效结合，进而实现血液、动物组织、粪便、病原微生物等样本中dna和rna的分离。

3、然而，目前磁珠法核酸纯化技术仍然存在一些问题，如核酸提取纯化耗时长，核酸提取效率低，核酸提取率低，不能满足在群体性疾病爆发时期对于核酸快速提取检测的需求。

4、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种核酸提取方法，以解决上述问题中的至少一种。

2、第一方面，本发明提供了一种核酸提取方法，采用磁珠法提取核酸，所述磁珠法采用粒径分布在100-1000nm范围的磁珠混合物，且磁珠粒径不唯一。

3、作为进一步技术方案，所述磁珠混合物包括粒径为190-210nm的磁珠、粒径为590-610mm的磁珠和粒径为980-1000nm的磁珠。

4、作为进一步技术方案，所述磁珠混合物包括粒径为200nm的磁珠、粒径为600mm的磁珠和粒径为1000nm的磁珠。

5、作为进一步技术方案，样品包括病毒样品或石蜡包埋组织样品；

6、所述磁珠包括硅羟基磁珠或羧基磁珠中的至少一种。

7、作为进一步技术方案，磁珠法提取核酸过程中，裂解步骤的加热方式为采用高于裂解温度18-22℃的温度将溶液加热至裂解温度。

8、作为进一步技术方案，所述裂解温度为53-58℃；

9、所述加热的时间为2.8-3.2min。

10、作为进一步技术方案，磁珠结合核酸后，将磁珠收集装置从裂解后溶液的液面间歇式移动至底部，洗脱后得到核酸；所述间歇式移动的方式包括：磁珠收集装置每移动3-4mm后间歇5-10s，直至移动至所述裂解后溶液的底部，间歇后结束。

11、作为进一步技术方案，所述磁珠法提取核酸在深孔板上完成；

12、完成洗脱步骤的洗脱孔的下部的孔径较磁珠吸附装置的直径大0.5-3mm。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、经发明人研究发现，核酸会被由于保存不当等多种原引起降解，使得核酸的片段会从几十bp-几万bp不等，而使用单一粒径的磁珠比较会有倾向性，有些会吸附到大片段的基因组dna和少量的降解片段，有些更倾向于吸附短片段，基于此，本发明提供的核酸提取方法，选用多分散不同粒径超顺磁性磁珠颗粒，颗粒大小从100nm-1000nm不等，通过不同粒径的多分散超顺磁性磁珠颗粒的组合使用，对不同大小的核酸片段均可瞬时捕获，可极大的提高磁珠对于核酸的提取效率。

技术特征：

1.一种核酸提取方法，采用磁珠法提取核酸，其特征在于，所述磁珠法采用粒径分布在100-1000nm范围的磁珠混合物，且磁珠粒径不唯一。

2.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠混合物包括粒径为190-210nm的磁珠、粒径为590-610mm的磁珠和粒径为980-1000nm的磁珠。

3.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠混合物包括粒径为200nm的磁珠、粒径为600mm的磁珠和粒径为1000nm的磁珠。

4.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，样品包括病毒样品或石蜡包埋组织样品；

5.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，磁珠法提取核酸过程中，裂解步骤的加热方式为采用高于裂解温度18-22℃的温度将溶液加热至裂解温度。

6.根据权利要求5所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解温度为53-58℃；

7.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，磁珠结合核酸后，将磁珠收集装置从裂解后溶液的液面间歇式移动至底部，洗脱后得到核酸；所述间歇式移动的方式包括：磁珠收集装置每移动3-4mm后间歇5-10s，直至移动至所述裂解后溶液的底部，间歇后结束。

8.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠法提取核酸在深孔板上完成；

技术总结
本发明提供了一种核酸提取方法，涉及生物技术领域。本发明提供的核酸提取方法，采用磁珠法提取核酸，所述磁珠法采用粒径分布在100‑1000nm范围的磁珠混合物，且磁珠粒径不唯一。经发明人研究发现，核酸会被由于保存不当等多种原引起降解，使得核酸的片段会从几十bp‑几万bp不等，而使用单一粒径的磁珠比较会有倾向性，有些会吸附到大片段的基因组DNA和少量的降解片段，有些更倾向于吸附短片段，而本发明提供的核酸提取方法，选用多分散不同粒径超顺磁性磁珠颗粒，通过不同粒径的多分散超顺磁性磁珠颗粒的组合使用，对不同大小的核酸片段均可瞬时捕获，可极大的提高磁珠对于核酸的提取效率。

技术研发人员：陈芝娟,王虹军,王世德,贺贤汉
受保护的技术使用者：杭州博日科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17