CHO细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法、CHO细胞及其应用与流程

本发明涉及生物制药，具体而言，涉及一种采用cho细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法、cho细胞及其应用。

背景技术：

1、近年来，生物制药市场中对重组治疗用蛋白的需求不断增强，包括重组抗体在内的治疗用蛋白产品制造工艺发展迅速。欧洲药品管理局(ema)和美国食品和药品管理局(fda)已经批准上市超过120个重组抗体类药物(doi.org/10.1007/s00253-022-12342-x)。通过几十年的发展，cho细胞已成为生物技术药物最重要的表达或生产系统，成为基因工程和生物制药重组蛋白类药物生产过程中不可或缺的一环。

2、cho细胞(中华仓鼠卵巢细胞)是生产蛋白类生物制品最重要的表达系统。在应用cho细胞进行抗体表达时，会遇到抗体的质量问题，如一些抗体高甘露糖糖型高于10％的行业认可标准(fda/ema(食品和药物管理局，美国/欧洲药品管理局，欧盟)已批准上市的抗体类生物大分子高甘露糖糖型水平低于15％，https://doi.org/10.1080/19420862.2018.1553476)。通过培养工艺优化是一种比较容易实现的调节抗体糖型修饰的方式，却也存在糖型调节剂的成本高，所需耗费的劳动成本和时间成本较高，抗体糖型调控效果不明显等诸多问题。

3、另外，较高的高甘露糖糖型占比也有造成机体产生免疫反应的风险。因此，在抗体开发过程中除了关注表达量之外，抗体的关键质量属性(如高甘露糖糖型占比)也是一款生物制品能否上市的决定性因素。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种cho细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法、cho细胞及其应用，以解决现有技术中cho细胞中表达抗体，抗体分子高甘露糖糖型水平较高的技术问题。

2、为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种cho细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法，包括：在cho细胞中表达抗体和gnt1。

3、进一步地，gnt1的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、进一步地，抗体为igg、igm、iga、igd和ige中的一种或多种。

5、进一步地，cho细胞为cho k1、cho dhfr-、cho dxb11、cho dg44、cho s、cho k1sv、cho k1q，或以上细胞经基因工程技术改造后的任一细胞系。

6、进一步地，gnt1的编码基因为经过密码子优化到cho细胞中表达，或是来源于ncbi数据库的核苷酸序列；优选的，gnt1的编码基因与抗体的轻链或/或重链的编码基因在同一个表达载体或者不同的表达载体上转染到cho细胞中；优选的，表达载体为能够在哺乳动物细胞中表达的载体，包含启动子和终止子；更优选的，启动子为cmv启动子、ef-1α启动子、efs启动子、cag启动子或sv40启动子中的一种或多种；更优选的，转染为瞬时转染或稳定转染。

7、根据本发明的另一方面，提供了一种cho细胞。该cho细胞包含表达载体，表达载体中包含编码抗体和gnt1的基因。

8、进一步地，gnt1的氨基酸序列如seq id no.1所示；和/或抗体为igg、igm、iga、igd和ige中的一种或多种；优选的，cho细胞为cho k1、cho dhfr-、cho dxb11、cho dg44、chos、cho k1 sv、cho k1q，或以上细胞经基因工程技术改造后的任一细胞系。

9、进一步地，gnt1的编码基因为经过密码子优化到cho细胞中表达，或是来源于ncbi数据库的核苷酸序列；优选的，gnt1的编码基因与抗体的轻链或/或重链的编码基因在同一个表达载体或者不同的表达载体上转染到cho细胞中；优选的，表达载体为能够在哺乳动物细胞中表达的载体，包含启动子和终止子；更优选的，启动子为cmv启动子、ef-1α启动子、efs启动子、cag启动子或sv40启动子中的一种或多种；更优选的，转染为瞬时转染或稳定转染。

10、根据本发明的再一方面，提供了一种上述cho细胞在抗体制备中的应用。

11、优选的，抗体为igg、igm、iga、igd和ige中的一种或多种。

12、应用本发明的技术方案，通过载体构建带入gnt1基因到cho细胞，改善抗体高甘露糖糖型占比偏高的问题，避免后续复杂的工艺摸索，避免多轮筛选，增加成本效益。

技术特征：

1.一种cho细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法，其特征在于，包括：在所述cho细胞中表达抗体和gnt1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述gnt1的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体为igg、igm、iga、igd和ige中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述cho细胞为cho k1、cho dhfr-、chodxb11、cho dg44、cho s、cho k1 sv、cho k1q，或以上细胞经基因工程技术改造后的任一细胞系。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述gnt1的编码基因为经过密码子优化到cho细胞中表达，或是来源于ncbi数据库的核苷酸序列；

6.一种cho细胞，其特征在于，包含表达载体，所述表达载体中包含编码抗体和gnt1的基因。

7.根据权利要求6所述的cho细胞，其特征在于，所述gnt1的氨基酸序列如seq id no.

8.根据权利要求7所述的cho细胞，其特征在于，所述gnt1的编码基因为经过密码子优化到cho细胞中表达，或是来源于ncbi数据库的核苷酸序列；

9.如权利要求6至8中任一项所述的cho细胞在抗体制备中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗体为igg、igm、iga、igd和ige中的一种或多种。

技术总结
本发明公开了一种CHO细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法、CHO细胞及其应用。其中，CHO细胞中调控抗体高甘露糖糖型的方法包括：在CHO细胞中表达抗体和GNT1。应用本发明的技术方案，通过载体构建带入GNT1基因到CHO细胞，改善抗体高甘露糖糖型占比偏高的问题，避免后续复杂的工艺摸索，避免多轮筛选，增加成本效益。

技术研发人员：杨正娇,陈家乐,石超群,赵普亚,程鑫茹,殷薛飞,徐嘉文,陈维斌,高凯
受保护的技术使用者：上海凯莱英生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17