抗志贺毒素抗体及其应用的制作方法

本公开属于生物医药领域，具体涉及一种抗志贺毒素抗体及其应用。

背景技术：

1、志贺毒素(shiga toxin，stx)是由志贺杆菌和某些大肠杆菌菌株(肠出血性大肠杆菌)产生的相关蛋白毒素。stx会导致严重的胃肠疾病，并伴有很高的发病率和死亡率。stx是已知最强的细菌毒素之一，该毒素会抑制蛋白质合成，最终导致受影响的组织细胞凋亡。

2、志贺毒素在疾病中的主要类型是stx1和stx2，stx1和stx2具有相同的酶学和结构特征，但在免疫学上是不同的。据估计，美国每年发生的stec(产志贺毒素大肠杆菌)感染病例超过11万例，其中约7.5万例是由大肠杆菌o157:h7感染引起的。许多感染o157:h7大肠杆菌的患者出现严重腹痛和血性腹泻，后者可能是由于stx对胃肠道小血管(微血管系统)内皮细胞的作用所致。在一些患者中，stec感染会导致严重的后遗症，称为溶血性尿毒症综合征(hus)。溶血性尿毒综合征的临床特征包括血小板减少、溶血性贫血和急性肾衰竭，最常见于10岁以下儿童。值得注意的是，与大肠杆菌o157:h7感染相关的溶血性尿毒综合征是美国和全世界儿童急性肾衰竭的主要原因。关于hus肾损伤发生的一种假说是血源性stx诱导肾小球微血管内皮细胞凋亡。然后在这些受损的血管中形成血栓，这是溶血性尿毒综合征的一个典型病理特征。

3、志贺毒素与宿主细胞膜上的受体gb3特异性结合。然后通过内吞作用进入细胞。因此，在早期的核内体中，志贺毒素通过逆行运输进入跨高尔基体网络和内质网(er)。志贺毒素亚单位a以核糖体为靶点，在从er进入细胞质后，通过其作为核糖体延伸复合物的一部分，对28s rna特异性的n-糖苷酶活性，使蛋白质合成失活。在受感染的细胞中，蛋白质合成被破坏，通过凋亡导致细胞死亡。由于gb3受体主要表达在肾小球细胞上，志贺毒素主要损伤肾小球细胞，引起肾功能顺坏，导致溶血性尿毒症综合征，未来针对志贺毒素的特异性中和抗体以预防和治疗产志贺毒素细菌感染具有广阔的应用前景和迫切的需要。

技术实现思路

1、本公开的目的在于提供一种可用于诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病的抗体及其应用。

2、本公开为解决上述技术问题，提出了如下技术方案：

3、本公开第一方面提供了一种结合志贺毒素的抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列seq id no:1、2、3、11、12、13、21、22、23、31、32、33或其任何变体的重链cdr，和/或选自氨基酸序列seq id no:6、7、8、16、17、18、26、27、28、36、37、38或任何变体的轻链cdr。

4、本公开第二方面提供了编码本公开第一方面所提供的抗体或其抗原结合片段的核酸。

5、本公开第三方面提供了包含本公开第二方面所提供的核酸的表达载体。

6、本公开第四方面提供了包含本公开第二方面的核酸或本公开第三方面的表达载体的细胞。

7、本公开第五方面提供了一种组合物，其包含本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段、本公开第二方面的核酸、本公开第三方面的表达载体和/或本公开第四方面的细胞。

8、本公开第六方面提供了一种试剂盒，其包含本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段、本公开第二方面的核酸、本公开第三方面的表达载体、本公开第四方面的细胞和/或本公开第五方面的组合物。

9、本公开第七方面提供了本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段、本公开第二方面的核酸、本公开第三方面的表达载体、本公开第四方面的细胞和/或本公开第五方面的组合物在制备用于诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病的药物或试剂盒中的用途。

10、本公开第七方面提供了本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段、本公开第二方面的核酸、本公开第三方面的表达载体、本公开第四方面的细胞和/或本公开第五方面的组合物在诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病中的用途。

11、本公开第八方面提供了一种诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段、本公开第二方面的核酸、本公开第三方面的表达载体、本公开第四方面的细胞和/或本公开第五方面的组合物。

12、本公开第九方面提供了一种使用本公开第一方面的抗体或其抗原结合片段检测志贺毒素的方法，其包括使所述抗体或其抗原结合片段与样品接触，检测所述抗体或其抗原结合片段与志贺毒素形成的结合物，以及任选地对所述结合物进行定量测定。

13、本公开的有益效果：本公开提供的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合志贺毒素，减少志贺毒素对细胞的杀伤作用，可用于诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病。

技术特征：

1.一种结合志贺毒素的抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列seq id no:1、2、3、11、12、13、21、22、23、31、32、33或其任何变体的重链cdr，和/或选自氨基酸序列seq idno:6、7、8、16、17、18、26、27、28、36、37、38或任何变体的轻链cdr。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列seq id no:1、11、21、31或其任何变体的重链cdr1，选自氨基酸序列seq id no:2、12、22、32或其任何变体的重链cdr2，选自氨基酸序列seq id no:3、13、23、33或其任何变体的重链cdr3；和/或选自氨基酸序列seq id no:6、16、26、36或其任何变体的轻链cdr1，选自氨基酸序列seq idno:7、17、27、37或其任何变体的轻链cdr2，和/或选自氨基酸序列seq id no:8、18、28、38或其任何变体的轻链cdr3。

3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含选自下列的重链和轻链的cdr的任一组合：

4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列seq id no:4、14、24、34或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列seq id no:9、19、29、39或其任何变体的轻链可变区；

5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含人重链恒定区和人轻链恒定区；优选地，所述人重链恒定区选自人igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区；优选地，所述人轻链恒定区选自λ轻链或κ轻链的轻链恒定区。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含选自下列的重链和轻链的任一组合：

7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体包括单克隆抗体和多特异性抗体的至少一种；所述抗原结合片段包括fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv和sdab的至少一种；优选地，所述抗体或其抗原结合片段是人源化的。

8.编码根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸。

9.包含权利要求8所述核酸的表达载体。

10.包含权利要求8所述的核酸或权利要求9所述表达载体的细胞。

11.一种组合物，其包含权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的核酸、权利要求9所述的表达载体和/或权利要求10所述的细胞。

12.一种试剂盒，其包含权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的核酸分子、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的细胞和/或权利要求11所述的组合物。

13.权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的核酸、权利要求9所述的表达载体、权利要求10所述的细胞和/或权利要求11所述的组合物在制备用于诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病的药物或试剂盒中的用途。

技术总结
本公开涉及一种结合志贺毒素的抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:1、2、3、11、12、13、21、22、23、31、32、33或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:6、7、8、16、17、18、26、27、28、36、37、38或任何变体的轻链CDR。本公开提供的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合志贺毒素，减少志贺毒素对细胞的杀伤作用，可用于诊断、治疗或预防志贺毒素引起的疾病。

技术研发人员：郑伟宏,王亚玉,王孝丽,王月明,廖化新
受保护的技术使用者：珠海泰诺麦博制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17