本发明涉及辅助生殖培养,尤其涉及一种辅助生殖培养用油及其制备方法。
背景技术:
1、轻质矿物油覆盖液滴培养系统已广泛用于哺乳动物早期胚胎的体外培养,其主要目的是防止培养液蒸发,维持培养液的ph值、渗透压及湿度的稳定。
2、轻质矿物油属于石油提炼加工产物,存在重金属离子、过氧化物等毒性,不同实验室采用很多方法进行验证,证明不同品牌、不同来源的轻质矿物油未提纯时均具有胚胎毒性,必须经过提纯加工后才可用于胚胎培养。
3、同时,现有的技术中的侧重点基本上只局限于对矿物油的提纯过程,这些技术虽然能够去除杂质,保证矿物油的使用安全。但是得到的油功能单一。对于辅助生殖培养体系没有协同作用。因此,对其进行进一步的开发利用非常必要。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种辅助生殖培养用油及其制备方法,开发一种使用效果优异的、对辅助生殖培养体系具有协同作用的辅助生殖培养用油。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种辅助生殖培养用油,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇1.8~2.2g/l、大豆卵磷脂3.6~4.0g/l、叶黄素0.02~0.06g/l。
4、作为优选,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇1.9~2.1g/l、大豆卵磷脂3.7~3.9g/l、叶黄素0.03~0.05g/l。
5、作为优选,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇2g/l、大豆卵磷脂3.8g/l、叶黄素0.04g/l。
6、本发明还提供了所述辅助生殖培养用油的制备方法,包括如下步骤:
7、(1)按照比例称取胆固醇、大豆卵磷脂和叶黄素;
8、(2)将石蜡油和hepes溶液混合后搅拌,静置后分液,得到清洗后的石蜡油;
9、(3)将清洗后的石蜡油、胆固醇、大豆卵磷脂和叶黄素混合,过滤后得到辅助生殖培养用油。
10、作为优选,步骤(2)中所述石蜡油和hepes溶液的体积比为1:5~7。
11、作为优选,步骤(2)中所述搅拌的时间为20~40min,搅拌的转速为50~70r/min。
12、作为优选,步骤(3)中所述过滤时采用的滤膜孔径为0.22~0.45μm。
13、本发明提供了一种辅助生殖培养用油及其制备方法,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇1.8~2.2g/l、大豆卵磷脂3.6~4.0g/l、叶黄素0.02~0.06g/l。本发明的辅助生殖培养用油可以用于体外辅助生殖过程中覆盖培养液或培养液滴,可降低培养液水分蒸发,防止因蒸发导致的配子和胚胎培养环境的改变,还可降低环境中的异物和微生物污染的风险,建立配子、合子或胚胎与外界环境间的保护屏障,同时不影响培养液的通气性。其中添加的胆固醇、大豆卵磷脂和叶黄素等物质能够提高培养物的活性,对于辅助生殖培养体系具有很好的协同作用。
1.一种辅助生殖培养用油,其特征在于,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇1.8~2.2g/l、大豆卵磷脂3.6~4.0g/l、叶黄素0.02~0.06g/l。
2.根据权利要求1所述的辅助生殖培养用油,其特征在于,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇1.9~2.1g/l、大豆卵磷脂3.7~3.9g/l、叶黄素0.03~0.05g/l。
3.根据权利要求2所述的辅助生殖培养用油,其特征在于,所述辅助生殖培养用油以石蜡油为溶剂,包括如下浓度的原料:胆固醇2g/l、大豆卵磷脂3.8g/l、叶黄素0.04g/l。
4.权利要求1~3任意一项所述辅助生殖培养用油的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述石蜡油和hepes溶液的体积比为1:5~7。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述搅拌的时间为20~40min,搅拌的转速为50~70r/min。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述过滤时采用的滤膜孔径为0.22~0.45μm。