一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法与流程

本发明涉及抗体，具体涉及一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法。

背景技术：

1、目前卵黄抗体制备生产工艺中未有对内毒素含量超标情况的去除纯化工艺，针对原料来源鸡蛋或鸭蛋本身携带大量内毒素，在制备过程中抗体带正电荷，抗体蛋白会与内毒素形成复合物，造成最终产品中内毒素含量超标的情况。生物制品中去除内毒素的方法比较多，如超滤法、吸附法、色谱法等，应根据生物制品的特点选择不同的方法。但针对卵黄抗体与内毒素形成复合物后，再运用上述方法则无法达到有效去除内毒素和蛋白高回收率的要求。

2、卵黄抗体的制备工艺中，通常第一步是卵黄分离，将蛋黄溶解在醋酸-醋酸钠缓冲液中，初步提取静置沉淀后上层的清液，可此ph值5.0条件下卵黄抗体带正电荷，会与内毒素结合在一起形成复合物，若原料来源中存在大量内毒素，内毒素本身会聚集形成聚集体，那么复合物之间、复合物与聚集体之间会形成更大的超聚体。针对此类超聚体以往的内毒素分离技术是失效的。因此，寻求一种满足去除卵黄抗体中内毒素的方法成为本发明亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，该方法通过改变目标抗体所在缓冲体系的方式，先改变超聚体的空间结构，使卵黄抗体与内毒素尽可能多的被分开，游离出来的内毒素再与未完全分开的超聚体结合，再通过离心的方法分离去除内毒素。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一个方面，本发明提供一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，包括如下步骤：将卵黄抗体所在缓冲体系的电导率设置为1.5～3ms/cm，ph值设置为6～7，渗透压设置为35～50mosmol/kg，然后将所述缓冲体系进行离心。。

4、优选地，所述电导率为1.8～2.8ms/cm。优选地，所述电导率为2～2.7ms/cm。更优选地，所述电导率为2.09ms/cm。

5、优选地，所述ph值设置为6.85，所述渗透压为37mosmol/kg。优选地，还包括将所述卵黄抗体所在缓冲体系进行预冷，所述预冷温度为2～8℃。

6、优选地，所述离心条件为2～8℃，离心力12840g。

7、第二个方面，本发明还提供一种构建去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，包括以下步骤：

8、s1设置具有不同电导率、ph值、渗透压的多个卵黄抗体缓冲溶液；

9、s2对上述步骤s1各个缓冲溶液进行离心，获得上清与沉淀；

10、s3将上述步骤s2的沉淀进行复溶，获得复溶液；

11、s4检测上述步骤s3上清液与复溶液中抗体蛋白含量、内毒素含量筛选出具有最佳电导率、ph值、渗透压的卵黄抗体缓冲溶液；

12、s5根据s4获得的最佳卵黄抗体缓冲溶液设定最佳离心条件。

13、优选地，所述s1还包括将所述卵黄抗体所在缓冲体系进行预冷，预冷温度为2～8℃。

14、优选地，所述s4具体为根据含量检测结果找到蛋白质回收率最佳的卵黄抗体缓冲溶液，对该卵黄抗体缓冲溶液样品检测离心上清液和复溶液的内毒素检测。

15、优选地，所述s4获得的最佳卵黄抗体缓冲溶液的电导率为2.09ms/cm、ph值为6.85、渗透压为37mosmol/kg。

16、优选地，所述s5最佳离心条件为离心条件2～8℃，12840g，10分钟。

17、第三个方面，本发明还提供一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的缓冲体系，所述缓冲体系的电导率为1.5～3ms/cm，ph值为6～7，渗透压为35～50mosmol/kg。

18、本发明的缓冲体系的电导率为1.5～3ms/cm，ph值为6～7，渗透压为35～50mosmol/kg，本发明通过大量实验验证发现当卵黄抗体处于电导率为1.5～3ms/cm，ph值为6～7，渗透压为35～50mosmol/kg环境中，可提高去除内毒素的效率。

19、优选地，所述电导率为2.09ms/cm，ph值为6.85，渗透压为37mosmol/kg时为去除内毒素的最佳缓冲液体系。

20、本发明的有益效果在于：本发明提供一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，通过先改变超聚体的空间结构，使结合状态下的卵黄抗体与内毒素尽可能多的被分开，再通过离心的方法去除内毒素。通过将卵黄抗体原液用2～8℃水稀释至电导率2mss/cm，再经过2～8℃，离心力12840g，离心10分钟，可获得蛋白质回收率大于80％，内毒素有效去除率90％的产品。

技术特征：

1.一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：将卵黄抗体所在缓冲体系的电导率设置为1.5～3ms/cm，ph值设置为6～7，渗透压设置为35～50mosmol/kg，然后将所述缓冲体系进行离心。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电导率为1.8～2.8ms/cm。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ph值设置为6.85，所述渗透压为37mosmol/kg。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括将所述卵黄抗体所在缓冲体系进行预冷，所述预冷温度为2～8℃。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心条件为2～8℃，离心力12840g。

6.一种构建去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述s1还包括将所述卵黄抗体所在缓冲体系进行预冷，预冷温度为2～8℃。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述s4具体为根据含量检测结果找到蛋白质回收率最佳的卵黄抗体缓冲溶液，对该卵黄抗体缓冲溶液样品检测离心上清液和复溶液的内毒素检测。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述s4获得的最佳卵黄抗体缓冲溶液的电导率为2.09ms/cm、ph值为6.85、渗透压为37mosmol/kg；所述s5最佳离心条件为离心条件2～8℃，12840g，10分钟。

10.一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的缓冲体系，其特征在于，所述缓冲体系的电导率为1.5～3ms/cm，ph值为6～7，渗透压为35～50mosmol/kg。

技术总结
本发明提供了一种去除卵黄抗体制备过程中内毒素的方法，包括如下步骤：将卵黄抗体所在缓冲体系的电导率设置为1.5～3mS/cm，pH值设置为6～7，渗透压设置为35～50mOsmol/kg，然后将所述缓冲体系进行离心。本发明通过先改变超聚体的空间结构，使结合状态下的卵黄抗体与内毒素尽可能多的被分开，再通过离心的方法去除内毒素，可获得蛋白质回收率大于80％，内毒素有效去除率90％的产品。

技术研发人员：夏振强,夏国智,王宏正,赵健,何雪萌,汪惠庆,刘迪,吕瑞娜,张洪亮,石晶
受保护的技术使用者：长春西诺生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11