一种抗SLAI纳米抗体及应用

本发明属于生物医学或抗原表位鉴定，具体涉及一种抗sla i纳米抗体及应用。

背景技术：

1、猪主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，简称mhc)，又称为sla(swine lymphocyteantigen)，即猪白细胞抗原。sla复合体位于第七号染色体上，由三个基因簇组成，分别为sla i、iii、ii类。sla i类和ii类区域分别编码sla i类分子和ii类分子，而iii类区域编码对免疫防御和炎症重要的基因。为防止误解为直接的hla同源物而将sla i类分子指定为sla-1、sla-2、sla-3。

2、其中，sla i类分子分布最为广泛，存在于所有有核细胞表面，sla i分子由重链α和轻链sβ2m组成，其中重链的α1与α2亚区形成多肽结合区，与抗原多肽、t细胞受体相互结合形成三分子复合物，从而诱导机体产生细胞免疫应答。轻链sβ2m与重链以非共价键结合，以稳定sla-i天然构型及其表达。sla i类分子与猪抗病性能相关，主要识别细胞毒性t细胞表位。有研究将人mhc i类分子、病毒ctl表位和轻链sβ2m进行体外复性、结晶，解析晶体结构，可以从空间结构解析mhc i类分子与病毒ctl表位结合的规律。因此，sla i类分子在猪病毒的t细胞抗原表位鉴定上的应用越来越受到人们的重视。

3、目前针对sla i类分子上的结合肽洗脱，可以通过免疫层析方式捕获sla分子后进行洗肽，而免疫层析需要有针对sla i类分子的抗体。目前针对sla i类分子的抗体多为鼠源或兔源，生产成本高。纳米抗体是在驼类动物上产生的，只有重链没有轻链的，一种10-14kd大小的小分子，用于小分子检测和疾病的治疗。与常规的四肽链抗体不同，其缺少传统抗体中的轻链和重链恒定区ch1区域，只有重链，也叫做重链抗体(heavy chain antibody，hcab)或单域抗体(single domain antibody，sdab)。其n末端的抗原结合区仅有重链可变区(heavy chain variable region，vhh)组成，vhh晶体结构显示其为宽2.5nm、长4nm的椭球形的抗体，由于结构微小，也叫做纳米抗体(nanobody，nb)。在结构上，传统免疫球蛋白(ig)由两个独立的区域组成，分别是片段抗原结合区(fab)和抗体恒定区(fc)。fc区在抗原结合时启动生物学过程，fab区负责抗原识别，整个ig分子的结合特异性全部源于fab区结构域，特别是顶部可变重链(vh)和可变轻链(vl)上的两个可变区。其中重链可变区包含4个骨架区(frs：免疫球蛋白结构域的中心框架结构)和三个抗原结合区(cdrs：参与抗原抗体反应)。vhh与人类vh的同源性高达80％，但是其中fr2和cdr3区表现显著的序列差异。fr2区的42、49、50和52氨基酸位点由亲水性更高的氨基酸替代，使vhh表现更好的亲水能力。与传统抗体的轻链加重链6个cdr区类似，仅有3个cdr区的vhh通常在抗原-抗体相互作用中发挥作用，其中，较长的cdr3区能够形成伸展出去的多肽环结构，可以识别蛋白质表面更多的空间表位。纳米抗体具有独特的性质例如分子量小，水溶性好，稳定性强，抗原识别能力强，易于生产等。目前尚未见如本申请所记载的抗sla i类分子的纳米抗体相关报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种抗sla i纳米抗体及应用，该抗sla i纳米抗体分子量更小，穿透性更强，结构简单并且稳定性也好，易于重组和表达，可通过细菌或酵母大量发酵生产，产量高且成本低，能够应用到与sla i相关的疾病诊断与预防、基础医学研究、生物学研究等多个领域。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种sla i结合分子，所述sla i结合分子包括抗sla i纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗sla i纳米抗体的互补结合区cdr包含cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包括seq id no：1所示的序列、cdr2包括seq id no：2所示的序列、cdr3包括seq id no：3所示的序列。

4、进一步的，所述sla i结合分子还具有以下一项或多项的特征：

5、(1)所述sla i结合分子为包含一条、两条或多条抗sla i纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体；

6、(2)所述纳米抗体为骆驼重链抗体；

7、(3)所述纳米抗体包括重链恒定区；

8、(4)所述sla i结合分子为嵌合抗体。

9、本发明还提供一种核酸分子，所述核酸分子选自以下任一项的序列：

10、(1)权利要求1所述sla i结合分子的编码序列；

11、(2)权利要求1所述sla i结合分子的编码序列的互补序列。

12、本发明还提供一种核酸构建物，包括权利要求3所述的核酸分子。

13、进一步的，所述核酸构建物为克隆载体、表达载体或整合载体。

14、本发明还提供一种所述的sla i结合分子或所述的核酸分子或所述的核酸构建物在与sla i相关的疾病诊断与预防中的应用。

15、本发明还提供一种所述的sla i结合分子或所述的核酸分子或所述的核酸构建物在基础医学研究领域和生物学研究领域中的应用。

16、本发明还提供一种所述的sla i结合分子或所述的核酸分子或所述的核酸构建物在针对sla i类的靶向疫苗设计中的应用。

17、本发明公开了以下技术效果：

18、本发明提供的抗sla i类分子纳米抗体相较于传统的抗sla一类分子抗体而言，分子量更小，穿透性更强，结构简单并且稳定性也好，易于重组和表达，可通过细菌或酵母大量发酵生产，产量高且成本低，将其用于sla一类分子的捕获或荧光显影中更具有优势。在细胞上捕获的sla i类分子上进一步进行洗肽从而进行t细胞表位鉴定；本发明提供的纳米抗体高特异性针对猪的sla i蛋白且该纳米抗体亲和力强且生产简便。

技术特征：

1.一种slai结合分子，其特征在于，所述slai结合分子包括抗slai纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗sla i纳米抗体的互补结合区cdr包含cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1包括seq id no：1所示的序列、cdr2包括seq id no：2所示的序列、cdr3包括seq id no：3所示的序列。

2.根据权利要求1所述的slai结合分子，其特征在于，所述slai结合分子还具有以下一项或多项的特征：

3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子选自以下任一项的序列：

4.一种核酸构建物，其特征在于，包括权利要求3所述的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物为克隆载体、表达载体或整合载体。

6.权利要求1-2任一项所述的sla i结合分子或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4-5任一项所述的核酸构建物在与slai相关的疾病诊断与预防中的应用。

7.权利要求1-2任一项所述的sla i结合分子或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4-5任一项所述的核酸构建物在基础医学研究领域和生物学研究领域中的应用。

8.权利要求1-2任一项所述的sla i结合分子或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4-5任一项所述的核酸构建物在针对slai类的靶向疫苗设计中的应用。

技术总结
本发明属于生物医学或抗原表位鉴定技术领域，具体涉及一种抗SLAI纳米抗体及应用。所述SLAI结合分子包括抗SLAI纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗SLAI纳米抗体的互补结合区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO：1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO：2所示的序列、CDR3包括SEQ ID NO：3所示的序列。本发明提供的抗SLA I类分子纳米抗体相较于传统的抗SLA一类分子抗体而言，分子量更小，穿透性更强，结构简单并且稳定性也好，易于重组和表达。本发明提供的纳米抗体高特异性针对猪的SLAI蛋白且该纳米抗体亲和力强且生产简便。

技术研发人员：张念之,杜刘宝,王素秋,汤子澈
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12