M2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及其制备方法与应用与流程

本发明属于生物医学，尤其涉及一种m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及其制备方法与应用。

背景技术：

1、传统伤口敷料虽然对慢性创面愈合有一定的辅助治疗效果，但是患者伤口的闭合效率主要还是依赖于护理人员的清创处理与自身修复能力，导致无限期的伤口愈合停滞。因此，基于伤口护理需要，开发出可加速组织再生与伤口闭合的伤口敷料是迫在眉睫的。

2、m2巨噬细胞具有抗炎表型，参与许多炎症性疾病，尤其是可以抑制细胞凋亡和炎症反应，促进伤口愈合。然而由于免疫排斥反应、不可降解的合成材料或支架，以及在伤口治疗中细胞活力难以维持等，细胞疗法在临床上的应用受到了巨大的限制。m2巨噬细胞分泌的囊泡同样被证明具有抗炎特性，并可靶向至炎症部位，还可促进巨噬细胞从促炎性m1表型向抗炎性m2表型的转变，进一步加速皮肤伤口愈合。但在正常情况下细胞自身分泌的囊泡数量极少，加之复杂的制备过程与纯化程序，阻碍了m2巨噬细胞自身分泌囊泡的临床转化。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及其制备方法与应用，所述m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡能够显著促进多种细胞的增殖与迁移，加速血管再生，促进伤口愈合，因此m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡和复合水凝胶均能促进伤口愈合，且复合水凝胶治疗伤口愈合的效果更好。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：

4、将传2～3代后的巨噬细胞培养在10％fbsdmem培养基中，待巨噬细胞融合率至50％～60％后，加入终浓度为8～12ng/ml il-4，培养20～28h后，诱导得到m2型巨噬细胞；

5、将所述m2型巨噬细胞用pbs重悬为单细胞悬液后，采用微孔滤膜挤出单细胞悬液，得到挤出囊泡；

6、将挤出囊泡在50000～100000g离心30～120min，收集沉淀a，用pbs重悬沉淀a后，在50000～100000g离心30～120min，收集沉淀b，得到m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡。

7、优选的，所述巨噬细胞包括鼠源或人源的巨噬细胞；所述微孔滤膜为1.2μm、0.6μm和0.22μm孔径的微孔滤膜。

8、优选的，所述巨噬细胞为巨噬细胞raw264.7。

9、本发明还提供了一种上述制备方法得到的m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡。

10、本发明还提供了一种复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

11、将甲基丙烯酸酐化明胶溶液与上述m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡混合后，光源照射凝胶化，得到复合水凝胶。

12、优选的，所述甲基丙烯酸酐化明胶溶液的制备方法包括将引发剂lap标准溶液与甲基丙烯酸酐化明胶加热溶解，即得。

13、优选的，所述m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡与甲基丙烯酸酐化明胶溶液的比例为7～9×108：1个/ml；所述照射的时间为10～40s；所述照射波长为405nm。

14、优选的，所述引发剂lap标准溶液质量体积浓度为0.2％～0.3％；所述加热溶解的温度为60～70℃，所述加热溶解的时间为20～30min。

15、本发明还提供了一种上述复合水凝胶的制备方法制备得到复合水凝胶。

16、本发明还提供了一种上述m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡或复合水凝胶在制备伤口愈合药物中的应用。

17、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

18、本发明提供了一种m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及其制备方法与应用，研究发现，m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡在促进细胞增殖与迁移、改善血管生成、调节炎症、伤口愈合、安全性高等方面有非常显著的优势，且本发明的复合水凝胶能够持续性释放m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、安全性高，从而达到高效愈合伤口的目的。本发明为伤口愈合的药物提供了新的选择。

技术特征：

1.一种m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述巨噬细胞包括鼠源或人源的巨噬细胞；所述微孔滤膜为1.2μm、0.6μm和0.22μm孔径的微孔滤膜。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述巨噬细胞为巨噬细胞raw264.7。

4.根据权利要求1～3任意一种制备方法得到的m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡。

5.一种复合水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述甲基丙烯酸酐化明胶溶液的制备方法包括将引发剂lap标准溶液与甲基丙烯酸酐化明胶加热溶解，即得。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡与甲基丙烯酸酐化明胶溶液的比例为7～9×108：1个/ml；所述照射的时间为10～40s；所述照射波长为405nm。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂lap标准溶液质量体积浓度为0.2％～0.3％；所述加热溶解的温度为60～70℃，所述加热溶解的时间为20～30min。

9.根据权利要求5～8任意一种制备方法制备得到复合水凝胶。

10.权利要求4所述的m2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡或权利要求9所述的复合水凝胶在制备伤口愈合药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种M2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、复合水凝胶及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。所述M2NVs的制备方法包括以下步骤：将巨噬细胞诱导得到M2型巨噬细胞，采用微孔滤膜挤出PBS重悬M2型巨噬细胞悬液，然后离心收集沉淀，得到M2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡。研究发现，M2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡在促进细胞增殖与迁移、改善血管生成、调节炎症、伤口愈合、安全性高等方面有非常显著的优势，且本发明的复合水凝胶能够持续性释放M2型巨噬细胞来源的工程化纳米囊泡、安全性高，从而达到高效愈合伤口的目的。本发明为伤口愈合的药物提供了新的选择。

技术研发人员：陈中建,张庭瑞,台宗光,朱全刚,缪丰泽,丁炜宏,王伟凡,赵颖超,吴君超,李丽莎
受保护的技术使用者：上海市皮肤病医院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21