一种牡丹籽粕生物碱的提取方法及其应用

本发明属于生物制药，具体的，本发明涉及一种牡丹籽粕抑菌成分生物碱的提取方法及其应用。

背景技术：

1、牡丹籽作为毛莨科植物牡丹的种子，包括牡丹籽壳和牡丹籽仁。经过一系列研究表明，牡丹籽中富含芍药苷、丹皮酚等成分因此具有多种药理作用，如抗菌、消炎、镇静等。在中医药临床治疗中，牡丹籽被广泛应用于治疗腰腿疼痛，被誉为清热凉血、活血化瘀的佳品。通过压榨、脱色、脱臭等工艺制成的牡丹籽油含有丰富的营养成分，包括不饱和脂肪酸、微量元素、角鲨烯、甾醇等，因此被誉为“世界上最好的油”和“植物油中的珍品”，具有治疗糖尿病、降血脂、降血压和提高免疫力等功效。

2、牡丹籽粕是牡丹种子的榨油副产品，不仅产量高，同样含有丰富的营养成分，主要为萜类、黄酮、多糖、蛋白质和微量元素等，具有一定的药用价值，可作为保健品原料、动物饲料和化妆品成分原料等。此外，牡丹籽粕也可用于生产生物质能源、有机肥料和环保材料等。因此，充分开发利用牡丹籽粕不仅可以实现资源的高效利用和经济效益的最大化，同时也符合可持续发展的理念。牡丹籽粕可以作为蛋白肽制作的来源，以牡丹籽粕为原料，通过酶解法制备蛋白肽，研究结果表明该多肽具有抗氧化能力，牡丹籽粕还可以用于制作蛋白肽药物和蛋白肽饮料。也有研究对经过榨油和干燥的牡丹籽粕进行高温水提、浓缩和冷冻干燥等制备工艺，制得了具有抑菌、抗氧化和保湿等多种作用的多糖类化合物，称为牡丹种子胶。然而，牡丹籽粕中的生物碱类抑菌成分的提取，现有技术鲜有研究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一种从牡丹籽粕中提取生物碱类抑菌成分的方法，获得高效抗菌的物质，以及测试相关抗菌物质的性能。

2、本发明的一个方面，本发明提供了一种从牡丹籽粕中提取生物碱的方法，所述方法包括如下步骤：

3、(1)在牡丹籽粕粉中加入乙醇进行超声辅助提取；

4、(2)离心获得提取液，残渣重复提取几次，合并提取液并浓缩得浸膏；

5、(3)将步骤(2)所得浸膏用酸溶解，过滤，残渣用酸洗涤，合并滤液；

6、(4)用碱调节滤液的ph值，然后用等体积的极性有机溶剂萃取；

7、(5)再次用碱调节滤液的ph值至碱性，然后用等体积的极性有机溶剂萃取；

8、(6)合并步骤(4)、步骤(5)所得萃取液，回收极性有机溶剂，即得牡丹籽粕总生物碱。

9、在本发明的一个实施例中：所述步骤(1)中的牡丹籽粕粉与入乙醇的料液比为1:10-1:30，优选的，所述料液比为1:15或1:20。

10、在本发明的一个实施例中：所述步骤(1)中乙醇选择65％-85％浓度的乙醇，优选的，所述乙醇为75％的乙醇。

11、在本发明的一个实施例中：所述步骤(1)中超声辅助提取的提取温度为20-60℃，优选60℃；超声功率为100-200w，优选150w或200w；提取时间为20-30min，优选25min或30min。

12、在本发明的一个实施例中，所述步骤(3)中的酸为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸，优选的，所述酸为盐酸。

13、在本发明的一个实施例中，所述步骤(4)和步骤(5)中的碱为氨水、nahco3、碱金属氢氧化钠化物，例如naoh、koh；优选的，所述碱为氨水。所述极性有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、石油醚，优选乙酸乙酯。

14、在本发明的一个实施例中，所述步骤(4)中调节滤液的ph值至3.0。

15、在本发明的一个实施例中，所述步骤(5)中调节滤液的ph值至10.0。

16、在本发明的一个实施例中，本发明所述一种从牡丹籽粕中提取生物碱的方法，还包括使用大孔树脂或硅胶柱层析纯化所述生物碱。优选的，所述大孔树脂为d101。

17、在本发明的一个实施例中，本发明提供了一种从牡丹籽粕中提取生物碱的方法，所述方法包括：

18、(1)准确称取5.0g牡丹籽粕粉末置于250ml三角瓶中，加入70％乙醇75ml，加塞置于超声清洗器中进行超声提取，超声提取的温度、功率、时间分别设为60℃、150w、25min；

19、(2)将提取液4000r/min离心5min，残渣重复提取2次，合并上清后浓缩得浸膏；

20、(3)将步骤(2)所得浸膏，用10ml 2％hcl溶解，过滤，残渣用10ml盐酸洗涤两次，合并滤液。

21、(4)用浓氨水调节滤液至ph＝3，用等体积乙酸乙酯萃取3次。

22、(5)用5mol/l naoh调节剩余的滤液至ph＝10，再用等体积乙酸乙酯萃取3次；

23、(6)合并步骤(4)和步骤(5)所得萃取液，回收乙酸乙酯，即得牡丹籽粕总生物碱。

24、本发明所提取的牡丹籽粕总生物碱还可以用于制备抗菌组合物，本发明所提取的牡丹籽粕总生物碱能够拮抗大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.04516mg/ml，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05645mg/ml。优选的，所述组合物为药物，其功效成分为本发明的牡丹籽粕总生物碱。

25、本发明所提取的牡丹籽粕总生物碱还可以用于制备抗炎的药物，本发明通过小鼠进行体内抗炎试验证实了牡丹籽粕总生物碱的抗炎作用效果，对二甲苯致小鼠耳廓肿胀和蛋清致小鼠足肿胀炎症均有一定的作用效果，与对照组相比炎症发生率分别下降80％和24％。

26、有益效果

27、本发明通过条件优化建立了从牡丹籽粕中提取生物碱类抑菌成分的方法，获得高的提取率，牡丹籽粕中提取生物碱得率达到了0.284mg/ml，为牡丹籽粕的再利用奠定了基础。

28、本发明通过优化生物碱的纯化方法，选择大孔树脂d101进行纯化，大孔树脂柱层析最佳上样条件：ph值为5.0、样品浓度为1.14mg/ml。再利用90％乙醇进行样品洗脱，生物碱的纯度由20.2％提高到48.6％，大幅度提升了样品的纯度。

29、本发明获得生物碱能够高效的抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.04516mg/ml，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05645mg/ml，同时通过小鼠炎症试验证实了其具有良好的抗炎效果。

技术特征：

1.一种从牡丹籽粕中提取生物碱的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的牡丹籽粕粉与入乙醇的料液比为1:10-1:30；优选的，所述料液比为1:15或1:20；所述步骤(1)中乙醇选择65％-85％浓度的乙醇，优选的，所述乙醇为75％的乙醇。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声辅助提取的提取温度为20-60℃，优选60℃；超声功率为100-200w，优选150w或200w；提取时间为20-30min，优选25min或30min。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中的酸为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸，优选的，所述酸为盐酸。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)和步骤(5)中的碱为氨水、nahco3、碱金属氢氧化钠化物，优选的，所述碱为氨水；所述极性有机溶剂为乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、石油醚，优选的，所述极性有机溶剂为乙酸乙酯。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中调节滤液的ph值至3.0；所述步骤(5)中调节滤液的ph值至10.0。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括使用大孔树脂或硅胶柱层析纯化所述生物碱，优选的，所述大孔树脂为d101。

8.一种从牡丹籽粕中提取生物碱的方法，其特征在于，所述方法包括：

9.根据权利要求1-8任一所述的从牡丹籽粕中提取生物碱的方法提取的生物碱在制备抗菌组合物中的应用，其特征在于，所述组合物为药物，所述药物能够拮抗大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。

10.根据权利要求1-8任一所述的从牡丹籽粕中提取生物碱的方法提取的生物碱在制备抗炎药物中的应用。

技术总结
本发明属于生物制药技术领域，具体的，本发明涉及一种牡丹籽粕抑菌成分生物碱的提取方法及其应用。本发明通过优化提取条件，使得牡丹籽粕中提取生物碱得率达到了0.284mg/mL，为牡丹籽粕的高值化利用奠定了基础。进一步的，本发明还优化了牡丹籽粕生物碱的纯化过程，利用选择大孔树脂D101进行纯化，纯度提升了20％以上，本发明提取的牡丹籽粕生物碱对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.04516mg/mL，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05645mg/mL，同时通过小鼠炎症试验证实了其具有良好的抗炎效果。

技术研发人员：刘浩哲,王在贵,李洋,李赵慧,吴蒙,谷子玉
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27