一种检测间充质干细胞免疫调节能力的方法与流程

本发明涉及生物医学领域中，一种检测间充质干细胞免疫调节能力的方法。

背景技术：

1、间充质干细胞(mesenchymal stem cell，msc)是一类存在于脐带、脂肪、骨髓等组织的成体干细胞，因其具有多向分化潜能、免疫调节功能和组织修复功能，多年来一直被广泛的应用于临床研究中。2017年，国家药品监督管理局发布了《细胞治疗产品研究于评价技术指导原则》明确细胞可以按照药品进行注册申报，截至目前中国已有40余项间充质干细胞相关的临床试验申请获cde批准或默示许可。其中包括难治性急性移植物抗宿主病(agvhd)、急性呼吸窘迫综合征(ards)、克罗恩病肛瘘和类风湿性关节炎等免疫系统相关疾病，msc治疗这些疾病是通过其免疫调节功能所实现的。

2、目前对于msc免疫调节能力的评价方法中，最直接与普遍的方法为检测msc对淋巴细胞增殖的抑制能力。cfse是一种会随着细胞分裂而衰减的染料，可检测细胞增殖能力，该方法是通过将msc与cfse处理的pbmc共培养后，检测pbmc中淋巴细胞的增殖能力而实现的。

3、但这种方法目前还存在着诸多问题：1)pbmc因为供体来源不同，pbmc的生物性能差异较大，对同一来源的msc使用不同的pbmc往往会得到差别很大的结果，会影响msc免疫调节能力的评价，使用这种方法往往不能得到稳定的结果。2)pbmc资源宝贵，因结果不稳定而导致评价失败是对这种医疗资源的浪费。3)这种方法的参数对实验的准确性有较大的影响，例如msc接种较多会导致msc脱落，msc接种较少则无法充分发挥生物学功能。效靶比、共培养条件等均会对评价结果的准确性造成影响，目前还无公认的较为稳定的方法参数。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是如何检测间充质干细胞免疫调节能力。

2、本发明首先提供了一种用于检测间充质干细胞免疫调节能力的pbmc筛选方法，所述方法包括：

3、(a)使用pbmc供者的性别进行筛选；

4、或，(b)使用pbmc供者的年龄进行筛选；

5、或，(c)使用pbmc中淋巴细胞比率进行筛选；

6、或，(d)使用pbmc中淋巴细胞子代增殖率进行筛选。

7、或以上a、b、c与d中任两种、任三种或四种的组合。

8、本发明还提供了检测间充质干细胞免疫调节能力的方法，所述方法包括：向pbmc的培养体系中添加植物血球凝集素与待测间充质干细胞后进行培养，培养结束后检测培养体系中淋巴细胞增殖情况，淋巴细胞增殖能力越强的待测间充质干细胞免疫调节能力越强，淋巴细胞增殖能力越弱的待测间充质干细胞免疫调节能力越弱。

9、上述方法中，pbmc供者的性别可为男性。

10、pbmc供者的年龄可大于25周岁。pbmc供者的年龄可小于35周岁。

11、上述方法中，pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞比率可大于15％。进一步，pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞比率可大于25％。

12、上述方法中，pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞子代增殖可率大于10％。

13、上述方法中，培养体系中pbmc与待测间充质干细胞的配比可为10:1。

14、上述方法中，所述培养体系所用培养可为1640完全培养基。

15、上述方法中，植物血球凝集处理待测pbmc的浓度可为10μg/ml。

16、上述方法中，所述培养的时间可为120小时。

17、本发明的检测间充质干细胞免疫调节能力的方法与现有技术相比，使用本发明筛选的pbmc去评价msc免疫调节能力，可以提高检测成功率与准确度。使用本发明的pbmc供者筛选的方法，可避免向不适合的供者采集pbmc，节省医疗资源。使用本发明筛选的pbmc评价msc免疫调节能力的方法，可快速准确的检测msc的免疫调节能力。

18、下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

技术特征：

1.一种用于检测间充质干细胞免疫调节能力的pbmc筛选方法，包括：

2.检测间充质干细胞免疫调节能力的方法，包括：向pbmc的培养体系中添加植物血球凝集素与待测间充质干细胞后进行培养，培养结束后检测培养体系中淋巴细胞增殖情况，淋巴细胞增殖能力越强的待测间充质干细胞免疫调节能力越强，淋巴细胞增殖能力越弱的待测间充质干细胞免疫调节能力越弱。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：pbmc供者的性别为男性；

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞比率大于15％。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞比率大于25％。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：pbmc在植物血球凝集素刺激培养后淋巴细胞子代增殖率大于10％。

7.根据权利要求6中所述的方法，其特征在于：培养体系中pbmc与待测间充质干细胞的配比为10:1。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述培养体系所用培养基为1640完全培养基。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：植物血球凝集处理待测pbmc的浓度为10μg/ml。

10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述培养的时间为120小时。

技术总结
本发明公开了一种检测间充质干细胞免疫调节能力的方法。本发明公开的方法包括：向PBMC的培养体系中添加植物血球凝集素与待测间充质干细胞后进行培养，培养结束后检测培养体系中淋巴细胞增殖情况，淋巴细胞增殖能力越强的待测间充质干细胞免疫调节能力越强，淋巴细胞增殖能力越弱的待测间充质干细胞免疫调节能力越弱。本发明的方法与现有技术相比，可以提高检测成功率与准确度。使用本发明的PBMC供者筛选的方法，可避免向不适合的供者采集PBMC，节省医疗资源。使用本发明筛选的PBMC评价MSC免疫调节能力的方法，可快速准确的检测MSC的免疫调节能力。

技术研发人员：张宇,王磊,齐奇,张云,李燕,侯瑞珍,潘锦华,石晓宇
受保护的技术使用者：武汉光谷中源药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27