一种鉴定花生野生种的特异性分子标记引物组及其应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种鉴定花生野生种的特异性分子标记引物组及其应用。

背景技术：

1、花生野生种arachis glabrata属于花生根茎区组，其高抗花生条纹病毒、抗锈病、褐斑黑斑病、条纹病毒、矮化病毒等多种花生主要病害，同时还具有耐旱和耐盐碱的特性，是栽培花生遗传改良的三级基因库。

2、追踪外源染色体的方法一般是借助细胞遗传学手段,通过荧光原位杂交的方法对染色体身份进行鉴定。这种方法的效率较低，一次只能鉴定一个样品。随着分子标记技术的发展,可以利用外源染色体特异性分子标记进行通量检测,从而大大提高了检测效率,

3、目前，在鉴定外缘染色体方面，多种类型的标记已成功开发并应用。例如在普通小麦背景中利用it标记，est标记和ssr标记等，可以成功鉴定出黑麦，簇毛麦及偃麦草等外源染色体。但是在花生中，鉴定其外源染色体身份的分子标记发展相对滞后。对于花生野生种arachis glabrata，仅有少数的ssr标记和te标记可追踪鉴定其染色体身份。

技术实现思路

1、针对上述技术问题,本发明提供一组特异性追踪鉴定花生野生种arachisglabrata的分子标记引物,为开展花生野生种外源优异基因向栽培花生品种的导入奠定了基础。

2、本发明的另一方面提供用于特异性鉴定花生野生种arachis glabrata染色体的分子标记引物。

3、一种鉴定花生野生种的特异性分子标记引物组，所述花生野生种为花生野生种arach is glabrata，所述引物组选自引物对g3chr8-1、g3chr9-1或其组合，所述引物对g3chr8-1的上游引物序列为ttcttgagttcacggtggtg，如seq id no:1所示，下游引物序列为c cacaaacattgagcttatgtacc，如seq id no:2所示，所述g3chr9-1上游引物序列为tgatcataggcgtaatcacaca，如seq id no:3所示，下游引物序列为gaggagatagatattgaggatgga a，如seq id no:4所示。

4、本发明的一个方面，上述引物组在鉴定花生野生种arachis glabrata中的应用。

5、本发明的一个方面，一种利用所述引物组从多个花生品种中鉴定出花生野生种arach is glabrata的方法，所述方法为：dna提取:取少量植物叶片，液氮研磨至粉末，使用植物dna提取试剂盒进行dna提取；pcr扩增:以提取的dna为模板,加入至少一对所述引物对进行pcr扩增,获得扩增产物，当扩增出250bp片段时即判定为花生野生种arachisglabrata。

6、本发明的一个方面，上述引物组在特异性鉴定远缘杂交后代是否含有花生野生种ara chis glabrata染色体中的应用。所述方法为：dna提取:取少量植物叶片，液氮研磨至粉末，使用植物dna提取试剂盒进行dna提取；pcr扩增:以提取的dna为模板,加入至少一对所述引物对进行pcr扩增,获得扩增产物，当扩增出250bp片段时即判定为其含有花生野生种arachis glabrata染色体。

7、本发明的有益效果在于：：1)本发明的引物对g3chr8-1、g3chr9-1特异性强，能够对花生野生种arachis glabrata提取的dna进行特异扩增，并能扩增出250bp片段，而对其他花生品种无扩增作用；2)本发明采用了一种新型的分子标记,较之ssr标记和t e标记具有更多的特异性设计位点,和更高的多态,可直接利用琼脂糖凝胶电泳平台进行分型,经济快速,不需要其他复杂的实验仪器,可重复性强；3)本发明采用分子标记形式,从dna水平揭示了普通栽培花生和野生种arachis glabrata的差异性,因此实验结果准确可靠；4)提供了一种鉴定花生野生种arachis glabrata染色体是否导入普通栽培花生的方法，缩短了实验周期,提高了鉴定效率,并节省实验成本,时间效果和经济效果显著。

技术特征：

1.一种鉴定花生野生种的特异性分子标记引物组，其特征在于：所述花生野生种为花生野生种arachis glabrata，所述引物组选自引物对g3chr8-1、g3chr9-1或其组合，所述引物对g3chr8-1的上游引物序列为ttcttgagttcacggtggtg，如seq id no:1所示，下游引物序列为ccacaaacattgagcttatgtacc，如seq id no:2所示，所述g3chr9-1上游引物序列为tgatcataggcgtaatcacaca，如seq id no:3所示，下游引物序列为gaggagatagatattgaggatggaa，如seq id no:4所示。

2.权利要求1所述的引物组在鉴定花生野生种arachis glabrata中的应用。

3.一种利用权利要求1所述引物组从多个花生品种中鉴定出花生野生种arachisglabrata的方法，所述方法为：dna提取:取少量植物叶片，液氮研磨至粉末，使用植物dna提取试剂盒进行dna提取；pcr扩增:以提取的dna为模板,加入至少一对所述引物对进行pcr扩增,获得扩增产物，当扩增出250bp片段时即判定为花生野生种arachis glabrata。

4.权利要求1所述的引物组在特异性鉴定花生野生种arachis glabrata染色体中的应用。

5.一种利用权利要求1所述引物组特异性鉴定花生野生种arachis glabrata染色体的方法，其特征在于：所述方法为：dna提取:取少量植物叶片，液氮研磨至粉末，使用植物dna提取试剂盒进行dna提取；pcr扩增:以提取的dna为模板,加入至少一对所述引物对进行pcr扩增,获得扩增产物，当扩增出250bp片段时即判定为其含有花生野生种arachis glabrata染色体。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定花生野生种的特异性分子标记引物组及其应用。所述花生野生种为花生野生种Arachis glabrata，所述引物组选自引物对G3chr8‑1、G3chr9‑1或其组合，所述引物对G3chr8‑1的上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物序列如SEQ ID NO:2所示，所述G3chr9‑1上游引物序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物序列如SEQ ID NO:4所示。本发明的引物对G3chr8‑1、G3chr9‑1特异性强，能够对花生野生种Arachis glabrata提取的DNA进行特异扩增，并能扩增出250bp片段，而对其他花生品种无扩增作用。

技术研发人员：孙昊杰,王传堂,姜春姣,苑广迪
受保护的技术使用者：山东省花生研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29