混合菌剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及细菌领域，具体涉及混合菌剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌均是饲料添加剂中可以添加的微生物，其产物丰富；枯草芽孢杆菌富产淀粉酶、淀粉酶、纤维素酶等，植物乳杆菌富产乳酸、乙酸等，它们在饲料日粮中被广泛应用。

2、目前，枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌均是单菌培养、单独储存。

3、枯草芽孢杆菌单独培养时，从开始培养到形成芽孢隔膜需要10-12小时，芽孢隔膜到形成游离芽孢，需要10-12小时，后期转孢时间长；整个发酵周期在20-24小时，放罐样品80℃水浴测定芽孢率为65％。单独储存时，枯草芽孢杆菌的代谢产物酶会继续分解未利用完的高分子物质，蛋白质降解成更小分子的氨基酸，氨基酸被代谢产物中脱羧酶和脱氨酶的作用，产生有机胺类物质，具有臭味，物料颜色逐步变深；同时因为速效营养的增加，部分芽孢会继续萌发，造成营养细胞继续生长，后因营养不够造成菌体死亡，储存30天时最终造成产品益生菌数量降低30-50％，80℃水浴测定样品的芽孢率为45％。

4、植物乳杆菌单独培养时，随着乳酸菌的生长代谢，乳酸含量不断增加，ph会从7.0降低到4.5，周期在14-16小时。当ph开始回升时，说明乳酸产量降低，即培养基营养逐渐减少、菌体活力开始下降，甚至出现死亡，最终造成产品益生菌下降20-40％，乳酸含量3.3％。单独储存时，因为营养的缺乏，储存7天，益生菌下降60-80％，乳酸含量维持不变。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供混合菌剂及其制备方法和应用。

2、为了实现上述目的，本发明第一方面提供了一种制备混合菌剂的方法，所述方法包括：

3、(1)将芽孢杆菌(bacillus)接入培养基进行第一培养；

4、(2)待所述芽孢杆菌镜检芽孢率为95％及以上时将乳杆菌(lactobacillus)接入所述第一培养得到的培养物中进行第二培养。

5、本发明第二方面提供了上述的方法制备的混合菌剂。

6、本发明第三方面提供了上述的混合菌剂在发酵饲料中的应用。

7、本发明第四方面提供了一种发酵饲料的方法，将上述的混合菌剂接种到发酵原料中。

8、通过上述技术方案，本发明的方法制备得到的混合菌剂，进行长时间的储存仍能保持芽孢杆菌和乳杆菌的活菌数，而且混合菌剂的外观和气味没有显著变化，且经过长时间的储存后也不会影响饲料的发酵。

技术特征：

1.一种制备混合菌剂的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于1l的培养基，所述芽孢杆菌的接种活菌数为109-1011cfu；

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)和凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)中的至少一种；

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)中的至少一种；优选地，所述植物乳杆菌的保藏号为cgmcc no.15013。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述第一培养的温度比所述第二培养的温度低0-2℃；

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述培养基包括葡萄糖、蔗糖、玉米粉、鱼粉、豆粕、酵母粉、硫酸锰、磷酸氢二钾、硫酸镁乙酸铵和柠檬酸钙；

7.权利要求1-6中任意一项所述的方法制备的混合菌剂。

8.权利要求7所述的混合菌剂在发酵饲料中的应用。

9.一种发酵饲料的方法，其特征在于，将权利要求7所述的混合菌剂接种到发酵原料中。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，相对于1g发酵原料，所述混合菌剂的接种量为5×108cfu至9×108cfu。

技术总结
本发明涉及细菌领域，公开了混合菌剂及其制备方法和应用。所述方法包括：(1)将芽孢杆菌(Bacillus)接入培养基进行第一培养；(2)待所述芽孢杆菌镜检芽孢率为95％及以上时将乳杆菌(Lactobacillus)接入所述第一培养得到的培养物中进行第二培养。通过上述技术方案，本发明的方法制备得到的混合菌剂，进行长时间的储存仍能保持芽孢杆菌和乳杆菌的活菌数，而且混合菌剂的外观和气味没有显著变化，且经过长时间的储存后也不会影响饲料的发酵。

技术研发人员：周勇,陈影,邴狄祥,卢宗梅,郭世堂,刘利利,朱光耀
受保护的技术使用者：中粮生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19