一种石蜡包埋组织切片DNA全自动提取的方法与流程

本发明涉及dna提取，具体为一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法。

背景技术：

1、样本的dna提取主要是ctab方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。

2、目前在石蜡包埋组织样本处理过程中需要多次人工参与，影响实验室效率，并且人工操作重复性与均一性不稳定；而且传统石蜡包埋组织样本核酸提取过程中使用的脱蜡试剂存在毒性。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一 些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

2、鉴于上述和/或现有一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法中存在的问题，提出了本发明。

3、因此，本发明的目的是提供一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，在使用时，将石蜡包埋组织放在石蜡切片机上进行切片，获取片厚为3-15μm组织切片；将切片组织漂浮于摊片机内的温水上，将组织展平，并用载玻片将待提取的组织捞起，放入烘箱中烘烤，待水分烘干后取出，每例样本制备4张切片。将两片石蜡切片转移入裂解液孔中，加入蛋白酶k溶液20μl(20mg/ml)；加入液体石蜡600μl至裂解液孔中。在适配的自动核酸提取纯化仪中放入预封板，装上磁针套启动设备，进入实验配置界面后，设置提取程序。启动程序，开始核酸提取操作。提取完成后核酸转移入无酶离心管中。

4、为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：

5、一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，包括：

6、s1：首先将石蜡包埋组织放在石蜡切片机上进行切片，获取片厚为3-15μm组织切片；将切片组织漂浮于摊片机内的45℃±5℃温水上，将组织展平，并用载玻片将待提取的组织捞起，放入烘箱中烘烤，待水分烘干后取出，每例样本制备4张切片；

7、s2：将两片石蜡切片转移入裂解液孔中，在裂解液孔中加入蛋白酶溶液和液体石蜡；

8、s3：向s2中添加纳米磁珠、清洗液及洗脱液；

9、s4：放置于自动化核酸提取仪中，设定核酸提取程序，开始核酸提取自动操作；

10、s5：提取完成后将含提取产物的洗脱液进行下一步操作，或转移至无酶

11、保存管中保存，并利用光度计测定提取物的核酸浓度和纯度。

12、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述裂解液由300μl 4-5m盐酸胍或异硫氰酸胍和300μl的异丙醇制备而成。

13、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述步骤s2中所述蛋白酶溶液的用量是20μl 20mg/ml，所述液体石蜡的用量是600μl至900μl。

14、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述纳米磁珠为粒径大小为100nm至300nm的硅羟基超顺纳米磁珠。

15、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述s3步骤中，所述清洗液由清洗液1和清洗液2组成，且清洗液1由16μl 0.5mtris、4.7mg nacl、300μl无水乙醇、180μl纯化水组成，清洗液2由500μl 75％乙醇组成。

16、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述s3步骤中，所述洗脱液为te缓冲液。

17、作为本发明所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法的一种优选方案，其中，所述步骤s4中的提取程序为：

18、。

19、与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

20、1.无需使用脱蜡试剂，从而避免与脱蜡试剂中的有毒成分接触。 2.人工操作步骤较少，全自动化dna提取过程，有效增加了提取效率。

技术特征：

1.一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述裂解液由300μl 4-5m盐酸胍或异硫氰酸胍和300μl的异丙醇制备而成。

3.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述步骤s2中所述蛋白酶溶液的用量是20μl 20mg/ml，所述液体石蜡的用量是600μl至900μl。

4.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述纳米磁珠为粒径大小为100nm至300nm的硅羟基超顺纳米磁珠。

5.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述s3步骤中，所述清洗液由清洗液1和清洗液2组成，且清洗液1由16μl 0.5m tris、4.7mgnacl、300μl无水乙醇、180μl纯化水组成，清洗液2由500μl 75％乙醇组成。

6.根据权利要求1所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述s3步骤中，所述洗脱液为te缓冲液。

7.根据权利要求4所述的一种石蜡包埋组织切片dna全自动提取的方法，其特征在于，所述步骤s4中的提取程序为：

技术总结
本发明公开一种石蜡包埋组织切片DNA全自动提取的方法，包括S1先将石蜡包埋组织切片，再将组织切片并放入摊片机内，再用载玻片将组织捞起放入烘箱中烘烤待水分烘干后取出制备成切片，S2将石蜡切片转移入裂解液孔中，在裂解液中加入蛋白酶溶液和液体石蜡，S3：在向S2中添加纳米磁珠、清洗液及洗脱液，S4在自动核酸提取纯化仪中放入预封板，装上磁针套启动设备，设置提取程序，启动程序，开始核酸提取操作，S5提取完成后将含提取产物的洗脱液进行下一步操作，或转移至无酶保存管中保存，并利用光度计测定提取物的核酸浓度和纯度，使得无需使用脱蜡试剂，从而避免与脱蜡试剂中的有毒成分接触，且能自动化完成提取。

技术研发人员：张化江,苗婷婷,刘奕,刘姗姗,李坦坦
受保护的技术使用者：山东艾克韦生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24